应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌做透射电镜怎么制样？
162/2返回列表上一页12
查看: 2302  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jianghe888

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-18 14:33:23
透射电镜？transmission electron microscope （TEM）的标本么？楼主要观察菌的什么？

观察菌的形态。请问拍照前怎么制样？
赞一下 回复此楼
11楼2015-08-18 15:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smilingworld

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
jianghe888: 金币+8 2015-08-19 10:22:27
引用回帖:
11楼: Originally posted by jianghe888 at 2015-08-18 15:58:23
观察菌的形态。请问拍照前怎么制样？...

大概制作过程：1. 从固体培养基上挑取10余个左右的单一菌落，放入到5ml PBS中，不要混入培养基成分。2. 混匀细菌液（PBS中），离心大概在3000 rpm， 10到15分钟左右（PBS就是清洗军体表面的培养及成分）。3. 去除PBS上清，加入2% glutaraldehyde－PBS 混合液（1～2ml）固定，低温保存（4度）2小时。4. 离心混合液，3000 rpm x 10 min，再加入5 ml PBS， 清洗， 离心。5. 加入1～2% OsO4（1～2 ml）再固定，振荡混匀， 低温保存（4度）2小时。6. 离心，去除上清夜，然后用glutaraldehyde－PBS 混合液清洗，离心，去上清 （glutaraldehyde 和 OsO4都是有害物质，需要存放在特殊的位置）。7. 准备2%的寒天，可溶解在PBS中，大概在寒天45度的时候用巴斯德pipet包埋细菌标本，然后放在载玻片上，待寒天彻底变成固体，用道边切成四方小体型（这一步过程中，寒天的温度不可过烫，否则烫坏菌体，不可过凉，否则混入细菌时不能包埋均匀）。8. 脱水，将寒天菌体四方小块，放入到50%，70％，90%，95%，100%的酒精中脱水，每一过程30 min。9. 重复100％酒精脱水2次，30 min。10. 准备树脂混合物，Epon：DDSA：MNA＝2:1:1， 混合均匀，加入2%的DMP－30，再混合均匀（2%是相对于树脂混合物来说，最后颜色大概为为橘红色）。11. 用制备完全的树脂混合物，1:1混合propylenoxide（树脂混合物要准备双份，既要最后埋入标本还要做此混合物），然后将固定，脱水好的标本浸入此混合物，存放过夜（overnight）。12. 将标本浸入到树脂混合物中。用小勺或者针头挑取浸入步骤11混合物过夜的标本，放入树脂混合物中。此过程中，树脂混合物应该放入到小的capsule中，白色塑料的，然后标本会慢慢沉入到树脂混合物的最底部，假如悬浮在树脂中，说明脱水过程不够完全。然后将沉入树脂底部的标本（capsule）放入到60度保温箱中，存放24小时以上，待树脂完全变硬，用特殊的仪器切此标本，我们研究室用的是一种准们的钻石刀。当然要先把变硬的标本用普通的刀片修整好，用钻石刀切之前，capsule尖头部的标本形态应该是梯形。为了区别标本，可以在树脂变硬前，用一个很小的纸注明标本的名称，然后放入树脂中，这样就可以知道标本是什么了，正好被固定在标本内，用铅笔。

希望我表述清楚了，也希望对你有用
赞一下 回复此楼
12楼2015-08-18 18:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
jianghe888: 金币+4, 谢谢！ 2015-08-24 10:31:19
离心=>戊二醛预固定=>悬球加戊二醛固定过夜=>锇酸固定=>梯度脱水=>二氧化碳临界点干燥=>浸透包埋聚合=>造模切超薄片=>醋酸铅负染=>直接载物或预处理=>TEM观察
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2015-08-19 15:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名
本帖仅楼主可见
14楼2015-08-19 16:01:49
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

huzhang01
祝福。。。
15楼2015-08-19 16:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

守望88

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
？？？怎么这样的？求教
赞一下 回复此楼
加油！
16楼2016-11-30 13:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jianghe888 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +15 Lanmanbaby 2026-08-09 23/1150 2026-08-11 09:51 by demonstreets
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +6 Tide man 2026-08-10 6/300 2026-08-11 09:45 by tangmnt
[基金申请] 帮忙看看fileCode +6 wwncly 2026-08-10 11/550 2026-08-11 09:14 by xiaruohan
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 16/800 2026-08-11 08:18 by wmfsnow
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭