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xuehu2008铜虫 (正式写手)
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[交流]
求助为什么PAGE电泳条带大小和估计的蛋白分子量不一致
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我在做蛋白的表达纯化，用pET32a载体，但是每次试表达时PAGE电泳的条带都比根据氨基酸数目估计的大十几KD，不知为什么？ 我的蛋白是32KD，可是每次的条带都在45左右。另外，做了对照也发现45KD的蛋白确实是诱导后表达。 [ Last edited by xyklmu on 2008-8-19 at 04:22 ] |
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xyklmu
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11楼2008-08-19 04:23:59
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xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复，积极交流
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帮你查了一下 pET32a-LIC Vector pET32a-LIC vector map T7 promoter 5121-5137 N-terminal tag 5209-5688 Trx-tag coding sequence 5209-5535 His-tag coding sequence 5557-5574 S-tag coding sequence 5608-5652 N-terminal cloning site 5674-5688 C-terminal cloning site 7704-7718 T7 terminator 7818-7864 f1 origin 12-467 bla coding sequence 599-1456 pBR322 origin 2217 lacI coding sequence 3651-4730 sacB coding sequence 6210-7628 N – terminal fusion sequence MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLAGSGSGHMHHHHHHSSGLVRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTENLYFQS Trx-tag： 105aa 加上你的32KD，大小在45KD正常 |
3楼2008-08-18 12:56:05
4楼2008-08-18 13:16:12
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
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谢谢chysx6 ！我深以为然。不知怎样才能把金币给你？不好意思，我是新手 5楼2008-08-18 13:17:17