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sadhappy

新虫 (正式写手)

[求助] 定量PCR溶解曲线,这样是什么意思?附图 已有2人参与

三个问题,
第一,溶解曲线开始抬得很高,什么意思?
第二,有2个目的基因的峰高低相差不少,低的可以用吗?
第三,峰前的小峰是有非特异扩增吗?

定量PCR溶解曲线,这样是什么意思?附图
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定量PCR溶解曲线,这样是什么意思?附图-1
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定量PCR溶解曲线,这样是什么意思?附图-2
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定量PCR溶解曲线,这样是什么意思?附图-3
Screenshot_2015-08-04-08-35-48_1438648620721.jpg
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高gaoeryang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

三个问题,
第一,溶解曲线开始抬得很高,说明起跳太早,建议降低模板浓度
第二,有2个目的基因的峰高低相差不少,低的可以用吗?只要峰的主抽一致,应该是可以用的
第三,峰前的小峰是有非特异扩增吗?答案是不一定。融解曲线不是单一峰最主要有以下几方面原因:引物特异性不好;引物被污染了;引物冻融次数太多;引物浓度太高(这时会有一个比较低的引物二聚体峰)。
4楼2015-09-15 17:16:45
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timmy1028

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
熔解曲线是检测引物设计是否合理的,峰越单一/越高,说明引物特异性越好。所以你可以看出来第一张图里的引物都很好。
不过有时cDNA/DNA模版降解也会导致熔解曲线Y值低,所以第三张图的原因不好分析
3楼2015-08-08 03:10:40
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