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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR溶解曲线，这样是什么意思？附图
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sadhappy

新虫 (正式写手)

[求助] 定量PCR溶解曲线，这样是什么意思？附图 已有2人参与

三个问题，
第一，溶解曲线开始抬得很高，什么意思？
第二，有2个目的基因的峰高低相差不少，低的可以用吗？
第三，峰前的小峰是有非特异扩增吗？

定量PCR溶解曲线，这样是什么意思？附图
Screenshot_2015-08-04-08-35-56_1438648603331.jpg


定量PCR溶解曲线，这样是什么意思？附图-1
IMG_20150803_191548.jpg


定量PCR溶解曲线，这样是什么意思？附图-2
Screenshot_2015-08-04-08-35-37_1438648634900.jpg


定量PCR溶解曲线，这样是什么意思？附图-3
Screenshot_2015-08-04-08-35-48_1438648620721.jpg
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1楼 2015-08-05 12:51:42
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sadhappy

新虫 (正式写手)
大神求解
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2楼2015-08-05 14:55:46
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timmy1028

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
熔解曲线是检测引物设计是否合理的，峰越单一／越高，说明引物特异性越好。所以你可以看出来第一张图里的引物都很好。
不过有时cDNA／DNA模版降解也会导致熔解曲线Y值低，所以第三张图的原因不好分析
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3楼2015-08-08 03:10:40
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高gaoeryang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

三个问题，
第一，溶解曲线开始抬得很高，说明起跳太早，建议降低模板浓度
第二，有2个目的基因的峰高低相差不少，低的可以用吗？只要峰的主抽一致，应该是可以用的
第三，峰前的小峰是有非特异扩增吗？答案是不一定。融解曲线不是单一峰最主要有以下几方面原因：引物特异性不好；引物被污染了；引物冻融次数太多；引物浓度太高(这时会有一个比较低的引物二聚体峰)。
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4楼2015-09-15 17:16:45
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