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kongzi183

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
hhedu-ny: 金币+4 2015-08-05 09:38:28
你这已经不是半定量了。。。看这算法这已经是相对定量。还有,四个复孔,这个的取舍要看溶解曲线,我虽然没做过几次,但是有个老师做给我看,我还记得,是在溶解曲线界面就把波动太大的舍去,不一定算平均值每个样本的重复都一样。另外,我有个相对定量的Excel表格,天亮去实验室看能不能发给你,以前有师姐给的。把自己的数值粘进入,一拖就出来了。(我本科毕业论文用到这个相对定量pcr,可是学的不太深,现在还没做这方面的也没再仔细学过,只能帮你这么点了)

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11楼2015-08-05 02:45:00
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kongzi183

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
另外,溶解曲线那个界面非常重要,也能看你设计的引物能不能用。如果大的波峰前边有小波峰。好像在八十之前有波峰就要注意了,引物可能不能用,(筛引物)。再有,我理解的半定量是跑完胶,用灰度软件分析,可是这个十分不准。也就能在紫外或蓝光下看看条带亮度,这么定性分析哪个表达量多少

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12楼2015-08-05 02:49:52
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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
hhedu-ny: 金币+2 2015-08-05 10:25:06
首先通过你的描述,你做的是定量PCR(real-time PCR,或称qPCR)而不是半定量PCR(semi-PCR)。
其次你没有弄懂Ct值和基因表达值的定义——你看看相关文献real-time PCR图的纵坐标就知道SD是表达水平的标准差。
...
日拱一卒,功不唐捐
13楼2015-08-05 08:13:20
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hhedu-ny

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by kongzi183 at 2015-08-05 02:45:00
你这已经不是半定量了。。。看这算法这已经是相对定量。还有,四个复孔,这个的取舍要看溶解曲线,我虽然没做过几次,但是有个老师做给我看,我还记得,是在溶解曲线界面就把波动太大的舍去,不一定算平均值每个样本 ...

谢谢你啊,有空麻烦发我一下
路慢慢其修远兮~
14楼2015-08-05 09:38:13
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kongzi183

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我还是建议,多百度点基本概念先看看,这样就不迷茫了

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15楼2015-08-05 10:10:36
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hhedu-ny

木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by Crescendo at 2015-08-05 08:13:20
首先通过你的描述,你做的是定量PCR(real-time PCR,或称qPCR)而不是半定量PCR(semi-PCR)。
其次你没有弄懂Ct值和基因表达值的定义——你看看相关文献real-time PCR图的纵坐标就知道SD是表达水平的标准差。
...

谢谢,我再看看
路慢慢其修远兮~
16楼2015-08-05 10:25:14
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17楼2015-08-05 10:52:20
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hhedu-ny

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by kongzi183 at 2015-08-05 10:10:36
我还是建议,多百度点基本概念先看看,这样就不迷茫了

我看你给点那表哥倍数的SD有的也很大啊,只要看Delta ct 的SD吗
路慢慢其修远兮~
18楼2015-08-05 11:55:14
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haze12344

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先,你的不是半定量,是荧光定量PCR。其次,你可以一个一个值去减,不用取平均
生物你好
19楼2015-08-07 07:59:02
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祝福
20楼2015-08-08 19:11:30
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