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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于半定量PCR问题
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kongzi183

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
hhedu-ny: 金币+4 2015-08-05 09:38:28
你这已经不是半定量了。。。看这算法这已经是相对定量。还有，四个复孔，这个的取舍要看溶解曲线，我虽然没做过几次，但是有个老师做给我看，我还记得，是在溶解曲线界面就把波动太大的舍去，不一定算平均值每个样本的重复都一样。另外，我有个相对定量的Excel表格，天亮去实验室看能不能发给你，以前有师姐给的。把自己的数值粘进入，一拖就出来了。（我本科毕业论文用到这个相对定量pcr，可是学的不太深，现在还没做这方面的也没再仔细学过，只能帮你这么点了）

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11楼2015-08-05 02:45:00
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kongzi183

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
另外，溶解曲线那个界面非常重要，也能看你设计的引物能不能用。如果大的波峰前边有小波峰。好像在八十之前有波峰就要注意了，引物可能不能用，（筛引物）。再有，我理解的半定量是跑完胶，用灰度软件分析，可是这个十分不准。也就能在紫外或蓝光下看看条带亮度，这么定性分析哪个表达量多少

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12楼2015-08-05 02:49:52
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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
hhedu-ny: 金币+2 2015-08-05 10:25:06
首先通过你的描述，你做的是定量PCR(real-time PCR,或称qPCR)而不是半定量PCR(semi-PCR)。
其次你没有弄懂Ct值和基因表达值的定义——你看看相关文献real-time PCR图的纵坐标就知道SD是表达水平的标准差。
...
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日拱一卒，功不唐捐
13楼2015-08-05 08:13:20
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hhedu-ny

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by kongzi183 at 2015-08-05 02:45:00
你这已经不是半定量了。。。看这算法这已经是相对定量。还有，四个复孔，这个的取舍要看溶解曲线，我虽然没做过几次，但是有个老师做给我看，我还记得，是在溶解曲线界面就把波动太大的舍去，不一定算平均值每个样本 ...

谢谢你啊，有空麻烦发我一下
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路慢慢其修远兮~
14楼2015-08-05 09:38:13
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kongzi183

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我还是建议，多百度点基本概念先看看，这样就不迷茫了
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15楼2015-08-05 10:10:36
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hhedu-ny

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by Crescendo at 2015-08-05 08:13:20
首先通过你的描述，你做的是定量PCR(real-time PCR,或称qPCR)而不是半定量PCR(semi-PCR)。
其次你没有弄懂Ct值和基因表达值的定义——你看看相关文献real-time PCR图的纵坐标就知道SD是表达水平的标准差。
...

谢谢，我再看看
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路慢慢其修远兮~
16楼2015-08-05 10:25:14
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stl409
17楼2015-08-05 10:52:20
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hhedu-ny

木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by kongzi183 at 2015-08-05 10:10:36
我还是建议，多百度点基本概念先看看，这样就不迷茫了

我看你给点那表哥倍数的SD有的也很大啊，只要看Delta ct 的SD吗
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路慢慢其修远兮~
18楼2015-08-05 11:55:14
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haze12344

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先，你的不是半定量，是荧光定量PCR。其次，你可以一个一个值去减，不用取平均
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生物你好
19楼2015-08-07 07:59:02
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冷雁孤旅
祝福
20楼2015-08-08 19:11:30
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