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iswearit

铁虫 (初入文坛)

[求助] 各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗? 已有9人参与

图片中marker从下到上分别是50bp,100bp,150bp,200bp,250bp,300bp,350bp,400bp,500bp.

各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗?
51-60(2).JPG


各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗?-1
51-60(3).JPG
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先得到的未必是好的
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
iswearit(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:20:15
测序是单引物pcr,正常情况下没有问题,只要你的质粒纯。
活着就要让人感受到你的存在。
6楼2015-08-01 21:17:04
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:21:32
你怎么确定是引物二聚体而不是非特异扩增?建议优化下PCR条件,提高退火温度看看。
2楼2015-07-30 22:30:47
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物二聚体大部分比较小,小于100bp吧
天生自弃难丽质
3楼2015-07-31 15:11:40
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
iswearit(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:20:05
你的目的条带是多少?400bp?如果是的话,那就扩出来了呀?只是特异性不好,提高2度退火试试。如果不是,那亮带也不能是引物二聚,太大了。
4楼2015-07-31 18:08:59
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