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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗?
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iswearit

铁虫 (初入文坛)

[求助] 各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗? 已有9人参与

图片中marker从下到上分别是50bp,100bp,150bp,200bp,250bp,300bp,350bp,400bp,500bp.

各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗?
51-60(2).JPG


各位老师 pcr产物有引物二聚体 会影响测序吗?-1
51-60(3).JPG
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先得到的未必是好的
1楼 2015-07-30 20:13:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
iswearit(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:20:05
你的目的条带是多少？400bp？如果是的话，那就扩出来了呀？只是特异性不好，提高2度退火试试。如果不是，那亮带也不能是引物二聚，太大了。
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4楼2015-07-31 18:08:59
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
iswearit(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:20:40
如果你的目的片段大小和引物二聚体大小差不多，那么测序会有影响。公司帮你纯化的时候，无法除去引物二聚体，有杂质，测序的峰图就会出问题，结果会失败。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
8楼2015-08-02 22:10:47
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普通回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:21:32
你怎么确定是引物二聚体而不是非特异扩增？建议优化下PCR条件，提高退火温度看看。
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2楼2015-07-30 22:30:47
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物二聚体大部分比较小，小于100bp吧
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天生自弃难丽质
3楼2015-07-31 15:11:40
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iswearit

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2015-07-31 18:08:59
你的目的条带是多少？400bp？如果是的话，那就扩出来了呀？只是特异性不好，提高2度退火试试。如果不是，那亮带也不能是引物二聚，太大了。

目的条带不到四百 也就是最亮上面那条带
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先得到的未必是好的
5楼2015-08-01 09:42:30
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
iswearit(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:20:15
测序是单引物pcr，正常情况下没有问题，只要你的质粒纯。
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活着就要让人感受到你的存在。
6楼2015-08-01 21:17:04
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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iswearit(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:20:26
你的应该是非特异性产物吧！引物二聚体大小一般都很小的～非特异性条带对测序是有影响的

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2015-08-02 18:45:08
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你测序只用一条引物啊，跟谁二聚啊？可以的，不行再换个方向引物测，反正不贵
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努力打败一切
9楼2015-08-03 12:22:33
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haze12344

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以纯化目的片段再测序就没问题
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生物你好
10楼2015-08-03 17:27:40
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