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njuzhangxin铁杆木虫 (小有名气)
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已知一个基因cDNA全长，6006 bp，想用高保真酶扩增出ORF区，一直扩增不出条带 已有6人参与
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| 已通过race获得一个基因cDNA全长，6006 bp，想用高保真酶扩增出ORF区，一直扩增不出条带。引物没有问题，因为扩增基因组DNA，可以扩增出大约6k多的条带。所以我觉得是RNA反转录成cDNA模板的问题。也查了一下，6k确实太大，有人建议把6k分成几段去扩增，分别去连接转化。想请教一下，扩增大片段基因的ORF区，是否应该用能获得cDNA全长的试剂盒？普通的反转录试剂盒反转录出的cDNA是不是有可能在基因某个位置是断裂的？或者大家有没有比较好的反转录试剂盒可以推荐，谢谢赐教。 |
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