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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求琼脂糖浓度
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iswearit

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-24 18:33:43
相差十几bp的两个序列分别是多大呢？序列本身比较大，那相差十几bp很难分开，但是如果序列本身只有100bp左右，用3%的胶还是有可能分开的。

都是200多bp 相差十几Bp
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先得到的未必是好的
11楼2015-07-25 13:23:55
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iswearit

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by maomao21ke at 2015-07-24 11:16:41
这个要怎么搞？    会不会是弄错了     咱们用的那些marker最小的间隔都得相差100bp呢

有间隔50bp的marker
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先得到的未必是好的
12楼2015-07-25 13:30:18
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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11楼: Originally posted by iswearit at 2015-07-25 13:23:55
都是200多bp 相差十几Bp...

这个你只能跑胶看了，估计不好区分。如果不想用PAGE，非要用琼脂糖凝胶，那试下PCR→酶切→琼脂糖凝胶电泳，就是看相差的部分是否有酶切位点变化，如果有，PCR结束后用相应的酶酶切后再跑电泳看结果。
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13楼2015-07-25 15:56:38
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iswearit

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-24 18:33:43
相差十几bp的两个序列分别是多大呢？序列本身比较大，那相差十几bp很难分开，但是如果序列本身只有100bp左右，用3%的胶还是有可能分开的。

谢谢你的回复。我在文献看到配制PAGE凝胶的方法，最后一句是将凝胶轻轻地浸入用l xTBE溶液配制的溴化乙锭染液中，染液将凝胶全
部没住。于室温下染色20～30 min。我们的EB是用去离子水配的，可以代替文献说的TBE吗。
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先得到的未必是好的
14楼2015-07-25 16:11:42
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
iswearit: 金币+3 2015-07-26 09:46:34
引用回帖:
14楼: Originally posted by iswearit at 2015-07-25 16:11:42
谢谢你的回复。我在文献看到配制PAGE凝胶的方法，最后一句是将凝胶轻轻地浸入用l xTBE溶液配制的溴化乙锭染液中，染液将凝胶全
部没住。于室温下染色20～30 min。我们的EB是用去离子水配的，可以代替文献说的TBE ...

只是染色用，应该是可以的。
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15楼2015-07-25 16:46:56
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
3%的胶，分离100和120应该还是可以的，要做好对照
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16楼2015-07-25 17:36:44
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iswearit

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-25 16:46:56
只是染色用，应该是可以的。...

用page胶的话 ，电压用多少啊，跑胶时间呢。谢谢
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先得到的未必是好的
17楼2015-07-26 09:46:29
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vivd娟

金虫 (小有名气)
要用PAGE来跑
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18楼2015-07-27 10:19:51
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sds-聚丙烯酰胺凝胶可以区别
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
19楼2015-07-27 17:53:35
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