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wildhui新虫 (著名写手)
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荧光定量PCR标准品无明显扩增！ 已有2人参与
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最近用Takara的一步法荧光定量TaqMan试剂盒（RR064A）检测病毒，扩增病毒的引物的灵敏性和特异性及探针是别的实验室验证过的，引物和探针是英俊新和成的。可是不但标本无扩增，连标准曲线都扩增不明显，标准品用的是体外转录的RNA，浓度1408ng/ul，通过公式计算出拷贝数后，10倍倍比稀释，从10的12次方稀释到10的0次方，然后分别取10的7次方到10的0次方的8个浓度及10的10次方到10的3次方的8个浓度，体系是20ul体系，反应条件为stage1：（reps1 ）42℃ 15min，95℃ 10s，stage2：（reps40）95℃ 10s，60℃ 34s.扩增了好几次，结果都类似。本人为新会员，没有金币给大家，请各位大侠帮我分析原因，万分感谢！！万分感谢！！图片如下： 标准品1  标准品1（浓度从10的10次方到10的3次方）  标准品1  标准品2  标准品2（浓度从10的7次方到10的0次方）  标准品2 |
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5楼2015-08-17 12:02:32
wildhui
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2楼2015-07-24 09:05:05
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