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玲林123

金虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 357
帖子: 44
在线: 71.1小时
虫号: 1325040
注册: 2011-06-17
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 跑PAGE蛋白胶已有3人参与

最近做在做western，可是跑胶上样这一步出现问题，上样孔里总是有小的胶体在里面，导致我上样上不进去，我想问一下这会是什么原因，我把梳子洗干净了，应该不是梳子的问题。还有显影发现我的内参没有条带，我的蛋白条带比较深，很疑惑。麻烦内行帮忙分析分析，不胜感激！

回复此楼

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1楼 2015-07-22 20:00:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sy0714541

木虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1917.5
散金: 430
红花: 2
帖子: 308
在线: 44.8小时
虫号: 1425816
注册: 2011-10-02
性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

应该是胶没有配好，你的TEMED 量多加一点试试，同时浓缩胶凝的时间可以延长到1h！显影的问题，可能是你因为你的内参失效了，你可以同时跑两块胶，一块做烤染，一块胶做WB；或是你的内参上样量太少，而样品上样太多，导致曝光时间很短的时候，内参由于浓度太低无法用肉眼辨别，内参一般上样100ng，同时你也要减少样品的上样量！