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追风的人偶

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[求助] 电泳Marker分子量的归属问题已有1人参与

蛋白样品为Aβ1-42，单体分子量为4.5 KD。
凝胶用的是Tricine-SDS-PAGE，三层胶，厚度1.5 mm，自己配的。
（图1）电泳条件是70V，跑了大约15h，怕时间久了温度太高，所以用了冰浴。
显色方案是银染，用的碧云天的快速银染试剂盒，显色时间大概在10 min左右。

Marker用的分别是Thermo的26616和26632（图2）：其中26616是预染的，我用它来观察蛋白泳动的情况，标注的分子量应该没问题，染色前70 KD的条带是红色的，10 KD的条带是绿色的；26632是非预染的。

问题是26632指示的分子量该怎么对照：
1、如果按（图1）中（1）标注的，10、15、25 KD的条带跟26616的能对上，但是3.4和5 KD的条带不见了，是什么原因造成的？
（（图3）是猜想它俩跑出去了，换了1 mm厚度的胶来跑，70 V，4 .5h，好像下面也干干净净的，啥都没有）。

2、如果按（图1）中（2）标注的，从下往上依次标注，要怎么解释两种marker指示的分子量差别那么大？

之前没怎么接触过电泳，最近才开始做，重复了好多次，都是差不多的结果，很困惑。请大家给咱指导一下，先谢谢了！

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错过了的就是永远。

1楼2015-07-22 17:26:02

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引用回帖:

4楼: Originally posted by LG123456789 at 2015-09-14 15:28:00
70V跑15h，，，
我们一般是100V-140V跑1-2h。
你银染显色的时间有点太长了吧，背景好深。
PS:本人新手，不对以上言论负责。
再PS:同制备Aβ寡聚体中，4度孵育后离心，上清里啥都没了。。

不知道你参考的孵育方法是否跟我一样，我参考的是W.L.Klein的方法。看了一篇14年的文章，他实验室验证自己的方法，可以得到80kDa的球形寡聚体。你再做的时候，可以考虑一下这个情况，因为我用三层胶跑的时候，感觉70kDa往上的条带，都不怎么跑得进分离胶里来。

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