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ylaxfyy

木虫 (小有名气)

[求助] 荧光染料/荧光探针荧光强度问题 已有3人参与

请问各位大神,有谁合成过某些荧光染料,在体外测试时候荧光很弱,但是在细胞内测试时荧光特别强(共聚焦的激光开的很弱,大概2%),我想知道这是什么原因!这个染料有个碳碳双键的桥连,两边的基团可以自由旋转,他的温敏和黏度性质我都测试过,它随着温度的升高荧光减弱,随着溶剂粘度的增加,荧光增强,但是只是增强了大约5倍。是不是这个染料和某些特殊的蛋白作用了,导致了碳碳双键不能自由旋转而荧光增强?还有您觉得这个荧光染料性能好不好?
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qqlqiao

新虫 (初入文坛)

在体外,由于双键的旋转,分子增加了非辐射越迁,导致光的淬灭,这与你的体外实验结果也相符,温度增加扭转速度增加,非辐射跃迁更加严重,而黏度增加恰恰限制了扭动。这一类带双键的分子,很多被用来测蛋白,原理就是它嵌插在蛋白里限制了其扭动,荧光明显增强,你在细胞中应该也是这个原因。

发自小木虫IOS客户端
14楼2016-11-02 09:20:09
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查看全部 14 个回答

上善若水0224

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2015-07-29 10:47:15
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ylaxfyy

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 上善若水0224 at 2015-07-29 10:47:15
前辈,我不太清楚你说的具体原因。另一事相询,荧光探针染色后杀死细胞还能用激光共聚焦观察到荧光么?因为做的是叶片组织,要观察截面和亚显微结构的时候必须得固定后杀死细胞。非常感谢

不好意思啊,没做过植物细胞。我们都是做的动物细胞(正常的细胞和癌细胞),如果在细胞被杀死之前细胞将荧光染料或者荧光探针吞进细胞内的话,共聚焦是能看到荧光的。
3楼2015-07-29 20:54:14
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nickeyluan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
udarling: 金币+1, 鼓励交流,欢迎再来! 2015-08-11 11:21:46
ylaxfyy: 金币+1, 有帮助 2015-08-11 20:20:49
会不会是PH的影响? 因为某些染料在极端的PH下,荧光效果会变弱
走马观花花已落,戎马倥偬又年年!
4楼2015-08-05 10:44:56
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