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ggyy0911铁虫 (正式写手)
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[求助]
毕赤酵母菌落PCR筛选，这样到底是转化进去没？ 已有3人参与
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我做的GS115，用Takara的Direct PCR裂解液裂解菌落，然后做菌落PCR，一端通用引物，一端特异性引物P不出来条带。 然后我用两端特异性引物P，结果有的菌就P出目的条带了。 最诡异的是我同时选了一个样做两端通用引物，P出了两条带，一条3K左右，一条淡淡的500bp，GS115本身有个条带就在3Kb附近，空载载体能P出500bp的条带，这样的话这个样就是空载咯？可是特异性引物P的时候，这个样是有目的条带的。 在我看来，用两端通用引物；一端通用一端特异；两端都特异；三种方法只要P出目的条带，结果不都是一样的吗。不然目的条带哪里来的，就算引物不够特异，也不会刚好是目的条带的大小啊。我目的条带3kb，没那么容易假阳性吧。看文献很多人都写用通用引物鉴定，那如果是我这种情况，到底是转化了没？P不出条带又是什么原因呢？ |
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