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俊松ing

木虫 (知名作家)

[求助] 各位虫友,我最近在克隆某基因的CDS区,但是它有3.5kb左右,总是P不出来 已有5人参与

各位虫友,我最近在克隆某基因的CDS区,但是它有3.5kb左右,总是P不出来,换了各种模板都不行。我该怎么办?有没有推荐的RT试剂盒或者什么方法啊?求教!
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如果你有梦想、全世界都会帮你实现
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thaw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-14 11:27:05
原因1、目的基因是诱导表达的,样品中表达量低
2、反转效果不好,不能把长基因反转完全
3、PCR酶不适合扩增长片段
建议
1,重新提RNA诱导后的材料
2,换反转录酶建议用英骏的
3,换PCR酶,建议用KAPA
8楼2015-07-12 11:30:01
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俊松ing

木虫 (知名作家)

自己先顶一下!大家来帮忙啊!
如果你有梦想、全世界都会帮你实现
2楼2015-07-08 10:34:36
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nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:47:55
首先你要保证提的RNA和反转的CDNA质量好,无降解。如果能知道这个基因在哪个组织或是条件下表达高就用那个样品的cDNA最好了。然后买一个扩长片段的PCR酶,试剂代理商肯定有卖的。
祝好运,求金币。
植物学
3楼2015-07-08 16:40:17
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:48:08
什么材料?RNA好不好,引物设计过关了没?这些都是关键

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-07-08 18:06:13
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