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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 若两同源基因仅有一个碱基不同，有相关的分子标记技术将其区分开么？
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hgschen

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 游侠892 at 2015-07-07 14:43:01
只要有变异，一般使用碱基错配的方式可以开发出标记。

关键是，具体该怎么操作？我多问问吧
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11楼2015-07-07 15:09:32
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by hgschen at 2015-07-07 15:07:51
这是我用DNAMAN查找限制酶后截的图，好像确实没有对应的酶……希望不是我DNAMAN用错了……

限制性内切酶.jpg
...

具体哪个碱基发生了什么样的变化?
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12楼2015-07-07 17:32:59
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hgschen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-07 17:32:59
具体哪个碱基发生了什么样的变化?...

就是那个红色箭头指的碱基，另外我从文献截的图，野生型的以第三个为准。还有，能有你的QQ或其他什么联系方式么，以方便交流？谢谢了。
若两同源基因仅有一个碱基不同，有相关的分子标记技术将其区分开么？
区别.JPG


若两同源基因仅有一个碱基不同，有相关的分子标记技术将其区分开么？-1
限制性内切酶.jpg
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13楼2015-07-07 19:57:29
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

的确没有酶切位点变化，那就按dCAPS的方法做。
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14楼2015-07-07 21:05:29
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by hgschen at 2015-07-07 15:09:32
关键是，具体该怎么操作？我多问问吧...

推荐你看一下“用等位基因特异PCR检测普通小麦的单核苷酸多态性”这篇文章你就可以知道怎么做了。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
15楼2015-07-08 09:53:47
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hgschen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-07 21:05:29
的确没有酶切位点变化，那就按dCAPS的方法做。

额，结果就是这样，所以，这大概是什么意思呢？
若两同源基因仅有一个碱基不同，有相关的分子标记技术将其区分开么？-2
dCAPS部分结果.png
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16楼2015-07-08 16:17:06
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hgschen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-07 21:05:29
的确没有酶切位点变化，那就按dCAPS的方法做。

问一下，那个dCAPS就是在引物上设酶切位点，但切下来也就20bp多点吧，产物一般400~1000多，缺了20bp，条带会有明显差异么？
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17楼2015-07-12 17:05:24
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
hgschen(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-14 22:47:31
引用回帖:
17楼: Originally posted by hgschen at 2015-07-12 17:05:24
问一下，那个dCAPS就是在引物上设酶切位点，但切下来也就20bp多点吧，产物一般400~1000多，缺了20bp，条带会有明显差异么？...

dCAPS引物可以设计长点，40bp左右，产物长度200-300即可，酶切后用3-4%的胶跑电泳，多跑一会，是可以区分开的。
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18楼2015-07-12 17:53:37
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hgschen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-12 17:53:37
dCAPS引物可以设计长点，40bp左右，产物长度200-300即可，酶切后用3-4%的胶跑电泳，多跑一会，是可以区分开的。...

我用prime premier 5设计对应的引物，发现分值都比较低，有什么解决方法么？
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19楼2015-07-14 10:36:03
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by hgschen at 2015-07-14 10:36:03
我用prime premier 5设计对应的引物，发现分值都比较低，有什么解决方法么？...

不用管那些，用dCAPS在线工具直接设计。
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20楼2015-07-14 12:18:04
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