24小时热门版块排行榜    

查看: 4104  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

[求助] 重叠延伸PCR的高手,求助!!!!! 已有10人参与

最近想用重叠PCR的方法,融合3个片段,大小分别为480,823,465,是三个同时融合容易还是先两个融再上第三个。第一轮的三个片段都已经得到,后面要做几轮PCR比较好,而且体系怎么加比较合适,用的是PrimeStar Max高保真酶P的。求高手能够详细指点,这只是第一步,后面还要连载体。多谢多谢!!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-06-29 23:46:28
三段一起装省时间,每个片段互相延伸进旁边的片段20bp, 也就是说有40bp重合,然后三个片段混合在一起跑10-15个循环。然后暂停PCR, 加入一对引物,正反引物要结合在拼接后片段最两端的位置。再跑25-30个循环。

如果只有15bp重合,能做吗?
5楼2015-06-30 09:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

Tama二等兵

新虫 (初入文坛)

这么小,三段一起装,或者拼个全长也是可以的啊
2楼2015-06-29 22:50:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Daniel_佳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Tama二等兵 at 2015-06-29 22:50:56
这么小,三段一起装,或者拼个全长也是可以的啊

谢谢您的回复,您能说的详细些吗?
3楼2015-06-29 23:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Daniel_佳(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-30 13:16:29
三段一起装省时间,每个片段互相延伸进旁边的片段20bp, 也就是说有40bp重合,然后三个片段混合在一起跑10-15个循环。然后暂停PCR, 加入一对引物,正反引物要结合在拼接后片段最两端的位置。再跑25-30个循环。
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2015-06-29 23:46:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 07化学280分求调剂 +5 722865 2026-03-23 5/250 2026-03-24 20:02 by dunai
[考研] 收08调剂生 +6 komorebi69 2026-03-18 6/300 2026-03-24 19:09 by 汪!?!
[考研] 085602 289分求调剂 +5 WWW西西弗斯 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:51 by jhhcooi
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见