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anglerenyan

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于Ev71 蛋白纯化

EV71 蛋白本身性质比较敏感脆弱
按照正常蛋白纯化步骤纯化完蛋白之后
总是表现的无活性
换了各种可疑条件,如 换buffer 换菌
破菌是用超声破碎法
每次纯化完之后核酸量很多
这会对蛋白活性有影响吗
而且蛋白性质不稳定,起初蛋白存在活性
不管放到-80 冰箱还是4度 冰箱,隔天蛋白失活。。
拜托各位虫子大神  希望能给点提示!!!!
一直做不出好的结果而且又找不到原因
真的很着急了!!!!
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加油吧骚年!
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-28 22:39:44
或许可以问以下几个问题
(1)蛋白活性的丧失是因为蛋白质激降解了,还是蛋白质变性了?
(2)如果蛋白质变性了,是逐步变性,还是立即变性?
(3)不同保存的方法,失活的情况有什么不同?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2015-06-28 17:41:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

追问一个问题,是polymerase?
行至水穷处,坐看云起时
3楼2015-06-28 17:47:47
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anglerenyan

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-06-28 17:41:26
或许可以问以下几个问题
(1)蛋白活性的丧失是因为蛋白质激降解了,还是蛋白质变性了?
(2)如果蛋白质变性了,是逐步变性,还是立即变性?
(3)不同保存的方法,失活的情况有什么不同?

谢谢你的问题,恳请指点~~~~
加油吧骚年!
4楼2015-06-29 17:11:24
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