24小时热门版块排行榜    

查看: 4599  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

[求助] 怎么判断重组质粒上的片段成功插入基因组 已有1人参与

我现在需要把构建的重组质粒上的片段插入到基因组,目的基因两端有同源臂(淀粉酶基因),所以可以看淀粉平板上的透明圈来筛选。
我用目的基因的引物扩增重组菌能扩出来目的基因,淀粉酶基因的引物做PCR也显示有片段插入
然后选这两对引物的其中一条配对做PCR,却得不到条带。
不知道我这种验证方法对不对,我还要不要继续验证下去
要怎样才能进一步验证目的基因成功插入到基因组中?
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-29 23:01:09
杨柳依依625: 金币+1, 有帮助 2015-07-03 20:41:25
插入位置的上下游设计引物进行PCR鉴定。
3楼2015-06-25 20:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-29 23:00:56
在目的基因上下游基因组选择引物pcr

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-25 19:54:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-25 19:54:06
在目的基因上下游基因组选择引物pcr

我有做这个,PCR产物确实比原来的要长(我是直接把菌水煮过后做的模板,不知道这样模板会不会不纯)
有文献上说这两对引物各选择一条配对做PCR,可是这个我怎么也做不出来,不知道是为什么
4楼2015-06-29 21:35:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-06-25 20:35:35
插入位置的上下游设计引物进行PCR鉴定。

这个我鉴定过了,确实比原来的片段要长
那我直接水煮的方法处理菌液做PCR模板会影响纯度吗?
5楼2015-06-29 21:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见