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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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杨仔儿

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] PMD-19-t载体连接问题,真心求助 已有18人参与

目的基因500多bp,pcr用的酶是:Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 plus dye),胶回收后连接,怎么都连接不上,求帮助。
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杨仔儿

管理员

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引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-06-23 15:07:30
能不能说的具体点,你这样描述没法找原因啊。

我用的是takara公司的Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 plus dye)酶p我的目的基因(500多bp),之后胶回收,浓度在70ng/ul左右,用胶回收的目的基因和pmd-18载体连接,用NEB公司的连接酶10ul体系:载体1ul,目的基因2ul,2X的buffer 5ul,DNA连接酶 0.5ul,水1.5ul,在25度温度下连接2h,做菌液PCR没有条带,提质粒跑核酸电泳,用空载体对照,结果条带显示一致,就是没连接上。我也用过takara的连接体系,过夜连接,结果都是没连接上。
3楼2015-06-23 15:44:56
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jiqinger

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能不能说的具体点,你这样描述没法找原因啊。
123456
2楼2015-06-23 15:07:30
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杨仔儿

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

就没有告诉一下的,
4楼2015-06-23 16:10:29
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flyy1986

超级版主

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
洗脱buffer有没有用含EDTA的溶液

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2015-06-23 17:19:41
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