24小时热门版块排行榜    

查看: 4407  |  回复: 46
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] PMD-19-t载体连接问题,真心求助 已有18人参与

目的基因500多bp,pcr用的酶是:Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 plus dye),胶回收后连接,怎么都连接不上,求帮助。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

li201018

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-25 22:07:10
胶回收产物一定要定量,按照载体:回收产物为1:3-1:10之间都好,最好16度过夜链接,10微升连接体系。祝好运!
低调!务实!
19楼2015-06-24 11:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 47 个回答

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能不能说的具体点,你这样描述没法找原因啊。
123456
2楼2015-06-23 15:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-06-23 15:07:30
能不能说的具体点,你这样描述没法找原因啊。

我用的是takara公司的Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 plus dye)酶p我的目的基因(500多bp),之后胶回收,浓度在70ng/ul左右,用胶回收的目的基因和pmd-18载体连接,用NEB公司的连接酶10ul体系:载体1ul,目的基因2ul,2X的buffer 5ul,DNA连接酶 0.5ul,水1.5ul,在25度温度下连接2h,做菌液PCR没有条带,提质粒跑核酸电泳,用空载体对照,结果条带显示一致,就是没连接上。我也用过takara的连接体系,过夜连接,结果都是没连接上。
3楼2015-06-23 15:44:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)

就没有告诉一下的,
4楼2015-06-23 16:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见