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1楼2015-06-16 14:52:51

易水秋寒

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【答案】应助回帖

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王小燕30(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-17 22:49:24

PCR扩增时使用的buffer是配套的buffer吗？正常LA Taq配套的是10xLA Taq buffer II。
适当减少些引物添加量试试呢，感觉引物量偏多。

7楼2015-06-17 08:19:17

查看全部 42 个回答

晞朔

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【答案】应助回帖

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请提供反应体系和程序。让大家参考参考

2楼2015-06-16 20:19:10

mangool

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有可能是提取核酸的纯度不好

3楼2015-06-16 20:33:08

王小燕30

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-06-16 20:19:10
请提供反应体系和程序。让大家参考参考

我做的是长距离PCR，要跑出的条带是12000和11000，就是应该是电泳图上最上边两条marker之间的条带。一直是拖尾。
三条引物是：（上游引物）P：5’一GCC CTG CCT GTC CAT TAC ACT GAT GAC ATT ATG CTG AC-3’
（下游引物）Q：5'-GGC CCT ACA ACC ATT CTG CCT TTC ACT TTC AGT GCA ATA-3’
（下游引物）B：5’-CCC CAA ACT ATA ACC AGC ACC TTG AAC TTC CCC TCT CATA-3’；
反应体系：引物P、Q、B(20 pmol／ul)分别2ul、1ul、1ul，模板基因组DNA 2ul(约100 ng)，TaKaRa LA Taq酶0．25ul(5 U／ul)，2×GC缓冲液I 12．5ul，dNTP 4ul，蒸馏水补足，总反应体积25ul。
反应条件：94℃预变性2 min，前10个循环98℃变性10 s，68℃退火／延伸10 min，后20个循环98℃变性10 s，68℃延伸10 min 20s，共进行30个循环。电泳：配制6g/L琼脂糖凝胶，PCR产物5ul与6×上样缓冲液1ul混匀上样，在恒压75 V电泳，成像
我就是想问问这样拖带可能跟什么关系最大

我做的时候就一直在变化引物浓度比例，和退火温度。用梯度PCR仪做过，退火温度从65、66、-69、70，也没什么明显的结果条带哦

4楼2015-06-16 21:55:43