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小肉团子

金虫 (小有名气)

[求助] MTT测细胞增殖应该选用几个时间点?CCK-8呢?表征改性后钛表面的生物相容性。 已有7人参与

我是做钛表面改性的,现在想表征其生物相容性,准备做细胞增殖实验,但是不知道该选用哪一种。现有两种:MTT和CCK-8,但是很多疑问:
1、关于方法选择:CCK-8方法比较便捷、灵敏,但是为什么现有的做生物材料的文献中很少有用CCK-8的,是因为CCK-8不同时间长度的不能比较吗?
2、关于时间点选择:文献中做MTT的,有用1个,2个还有3-5个时间点的,这个应该怎么选择呢? 如果用CCK-8又需要做几个时间点呢?
3、无论哪种方法,一般需要重复几次数据才算有效呢?
本人学材料的,对生物方面了解甚少,最近因为这些问题很苦恼,又比较着急知道,查了很多查不到答案,还请各位前辈虫友们赐教!真得很感谢!!
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yln2017

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 勿空 at 2015-06-14 11:16:13
1、我们以前用的MTT,后来用的CCK-8比较多。相对来说,CCK-8更加灵敏,更加便捷,但是价格稍微贵点
2、时间点是根据你的实验安排的,最好看看相关的参考文献。一般有1天、4天、7天,或者7天、14天。
3、平行样本的 ...

请问一下,我做淋巴细胞增殖实验,淋巴细胞是悬浮细胞,药物有氧化还原性,加入CCK-8之前需要更换新的培养基,实验室没有平板离心机,该怎么操作,特别困扰我,知道的同学麻烦告诉我一下,不胜感激。
12楼2017-02-18 18:37:49
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likedong1021

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小肉团子(markar代发): 金币+2, 赞一个! 2015-06-13 20:36:36
小肉团子: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-06-15 09:13:00
问题1,CCK-8的原理跟MTT相似,不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤,因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小。但是CCK-8比MTT的价格要贵不少,所以一般来说,还是MTT法用的多。
问题2,没有明白你说的时间点是什么,是测量周期么?这个应该和你选择的细胞有关
问题3,材料一般要做3个重复样,每个重复样还要做3个MTT或者CCK-8
希望可以帮到你
大家都走的路并不一定适合你,遭他人侧目有两种可能,一种是你疯了,一种是他们疯了
2楼2015-06-12 06:19:26
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xingxin02

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+2, 干得漂亮! 2015-06-13 20:36:59
小肉团子: 金币+6, ★★★很有帮助, 很认真,谢谢 2015-06-15 15:49:49
第一点,如楼上所说MTT比较经典,便宜,不过CCK-8也不是很贵(相对于动辄两三千块的抗体来说),CCK-8价格是几百块吧,CCK-8操作简单,不需要溶解这一步,而且染色后更换培养基,细胞可以继续养。
第二点,无论是MTT还是CCK-8,做细胞的增殖实验(或是生长曲线),肯定是需要检测多个时间点的,比如1天,3天,5天,7天。一个时间点的,那可能是细胞毒性实验,比如说不同浓度药物对细胞毒性的影响,加入不同浓度的药物,培养24h(根据药物情况,一般24h或者48h)。
第三点,每个孔至少有三个副孔。
3楼2015-06-12 14:47:47
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勿空

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小肉团子: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-06-15 15:50:17
小肉团子: 金币+2 2015-06-19 09:31:01
1、我们以前用的MTT,后来用的CCK-8比较多。相对来说,CCK-8更加灵敏,更加便捷,但是价格稍微贵点
2、时间点是根据你的实验安排的,最好看看相关的参考文献。一般有1天、4天、7天,或者7天、14天。
3、平行样本的话当然越多越好,但是为了实验简便和科学需要,一般至少做3个,我们一般做5-6个,减少误差。
小虫是做生物医用钛材研究的,诚恳向各位前辈请教
4楼2015-06-14 11:16:13
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