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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » taq酶活力检测
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yiye1220

新虫 (小有名气)

[求助] taq酶活力检测 已有1人参与

我想用荧光PCR的方法检测自己表达的taq酶活力，用商品化酶做对照，问一下大家如果在相同的反应条件和体系下，两种酶的扩增的Ct值相近是否可以认为自己表达的酶和商品化酶酶活力一致，急等回答。
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1楼 2015-06-09 14:18:59
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yiye1220

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gundogan at 2015-06-11 10:25:18
商品酶也应该做相同倍数的稀释吧，这样的比较才有意义。换模板，你首先要确定你的体系是没问题的...

使用商品酶扩增不同模板的体系都已确定，扩增都正常。目前就是利用这个确定的体系，只是将商品酶换成了不同倍数稀释自己表达的酶，通过比较ct值显著性差异和荧光曲线，来确定自己表达酶的酶活性是否与商品酶相近。但是不同模板比较，显著性差异可能不同，这个最终应该怎么决定
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5楼2015-06-11 12:59:11
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gundogan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yiye1220: 金币+10, ★有帮助 2015-06-11 09:58:03
那要看你的体系中，酶活是不是限制因素，如果是，那可以认为两种酶的酶活相当
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2楼2015-06-10 09:27:36
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yiye1220

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gundogan at 2015-06-10 09:27:36
那要看你的体系中，酶活是不是限制因素，如果是，那可以认为两种酶的酶活相当

那如果我以商品酶的ct值为标准，用不同稀释倍数表达酶的ct值与之进行显著性比较，p<0.05认为差异显著，这样的结果可信吗，还有如果我做一种模板，两者无明显差异，但换了另一种模板两者差异显著应该如何评判。
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3楼2015-06-11 10:03:00
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gundogan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yiye1220 at 2015-06-11 10:03:00
那如果我以商品酶的ct值为标准，用不同稀释倍数表达酶的ct值与之进行显著性比较，p<0.05认为差异显著，这样的结果可信吗，还有如果我做一种模板，两者无明显差异，但换了另一种模板两者差异显著应该如何评判。: ...

商品酶也应该做相同倍数的稀释吧，这样的比较才有意义。换模板，你首先要确定你的体系是没问题的
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4楼2015-06-11 10:25:18
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