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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 酵母做电转时点转杯大小有关系吗
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小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗 已有1人参与

最近在做酵母电转化，实验室只有0.4mm点转杯，想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢？
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简简单单才是真
1楼 2015-06-08 16:33:14
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
小橘子2013: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2015-06-11 15:53:27
引用回帖:
12楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-10 15:46:14
参数是2KV，200Ω，25uf，5s

dna是酶切三小时后用乙醇沉淀的

酵母感受态就是最普通的制备方法 OD600=1.0  收集后水洗两次  山梨醇洗一次 1ml山梨醇重悬 80ul每管分装的...

你放电时间有5秒钟？而不是5ms？
如果放电时间确实是5s，那你出现电火花的原因不是由于酵母细胞和DNA预处理不干净使得离子浓度过大导致的短路放电。而是你加样过少导致的电极杯两端平行板根本没有连通导致的电阻过大，平行板两端长时间维持2000v左右的高电压直到电弧产生电荷转移。最简单的处理办法就是多加样，让电路连通，放电时间自然会回到正常范围内。
1. 4mm杯子容量比较大，至少在2ml以上，电场强度相对较低。LZ多加样的思路是对的，也不需要太多，400ul足以让电路连通，2Kv够用了，电击后1M山梨醇添加量1ml——2ml都可以。
2.  1mm的杯子同样电压下提供的场强非常强，所以如果换用1mm的杯子，按照LZ你原来的80ul完全可以连通电路，电压在800v——1500v之间，其与参数维持不变。
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大家相互帮助哈
13楼2015-06-11 02:10:21
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
我们一般用0.2的或者0.1的，理论上大点影响也不是很多。

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2楼2015-06-08 19:15:19
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-08 19:15:19
我们一般用0.2的或者0.1的，理论上大点影响也不是很多。

我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗
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简简单单才是真
3楼2015-06-08 21:09:58
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-08 21:09:58
我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗...

一般我们不会装满，装200微升就够了。。。。没必要装满，至于质粒，一般体积控制在5微升和酵母混合。。。感受态细胞多少其实不太重要，多点也没关系。酵母很好转

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4楼2015-06-08 21:17:52
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