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小橘子2013

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗已有1人参与

最近在做酵母电转化，实验室只有0.4mm点转杯，想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢？

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简简单单才是真

1楼 2015-06-08 16:33:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
小橘子2013: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2015-06-11 15:53:27

引用回帖:

12楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-10 15:46:14
参数是2KV，200Ω，25uf，5s

dna是酶切三小时后用乙醇沉淀的

酵母感受态就是最普通的制备方法 OD600=1.0 收集后水洗两次山梨醇洗一次 1ml山梨醇重悬 80ul每管分装的...

你放电时间有5秒钟？而不是5ms？
如果放电时间确实是5s，那你出现电火花的原因不是由于酵母细胞和DNA预处理不干净使得离子浓度过大导致的短路放电。而是你加样过少导致的电极杯两端平行板根本没有连通导致的电阻过大，平行板两端长时间维持2000v左右的高电压直到电弧产生电荷转移。最简单的处理办法就是多加样，让电路连通，放电时间自然会回到正常范围内。
1. 4mm杯子容量比较大，至少在2ml以上，电场强度相对较低。LZ多加样的思路是对的，也不需要太多，400ul足以让电路连通，2Kv够用了，电击后1M山梨醇添加量1ml——2ml都可以。
2. 1mm的杯子同样电压下提供的场强非常强，所以如果换用1mm的杯子，按照LZ你原来的80ul完全可以连通电路，电压在800v——1500v之间，其与参数维持不变。