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植物SOD的提取
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SOD活力测定 （1）邻苯三酚自氧化率的测定 取4.5ml50 MMOL/Lph 8.3的磷酸缓冲液，4.2 ml蒸馏水和1 ml 10MMOL/L EDTA-Na溶液混匀后在25 度水浴保温20M，取出后立即加入25度预热过的邻苯三酚溶液0.3ML 迅速摇匀，倒入光径1ml的比色杯内，用10 MMOL/LHCL做空白，325nm波长下每隔30S测光密度值一次，整个操作在4M内完成，计算出每分钟A325的增值，此即为邻苯三酚自氧化率。要求自氧化率控制在0.07/ M左右。 （2）酶活力测定 操作与（1）基本一致，加入邻苯三酚前，先加入一定体积的SOD样液，蒸馏水则减少相应的体积，同理测其光密度值，计算加酶后邻苯三酚自氧化率。 （3）酶活性单位的计算 根据酶活性单位的定义，按下列公式计算酶活性： 单位活性 (U/ ml)=(A0-Am)/A0*100%/50% *反应液总体积*样液稀释倍数/样液体积 其中A0为邻苯三酚自氧化率；Am为加酶后邻苯三酚自氧化率 总活性（U）=单位活性*酶原液总体积 （4）蛋白质含量测定 标准曲线的制作：取6支具塞试管编号，按下表加入试剂： 试剂 管号 1 2 3 4 5 6 蛋白质标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 考马斯亮蓝G-250(ml) 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量(ug) 0 20 40 60 80 100 盖上盖子，摇匀。注意各管振荡程度尽量一致。组织595nm波长下比色测定光密度值，比色应在1个小时内完成。以蛋白质含量为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。 [search]SOD[/search] |
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