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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于热启动taq酶和逆转录酶相互抑制的问题
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zhangyep121

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于热启动taq酶和逆转录酶相互抑制的问题

亲们，发挥大家想象力和智商的时候到了，我现在遇到一个PCR难题，跟大家讨论一下，希望大家集思广益，支支招，在做RNA类扩增的时候，发现逆转录酶对热启动taq酶存在抑制作用，这一点已经确认了，目前发现，只有在taq酶和逆转录酶都有活性的情况下，才会抑制，taq酶只有在跟Mg2+接触时，才有活性，也就是说，不遇到镁离子，taq酶是不会受逆转录酶影响的，而50度逆转录期间，taq酶一旦具有活性，就会被体系中的逆转录酶搞，影响扩增效果，但是50度时如果没接触到逆转酶，即使在95度时加入逆转录酶，是不会影响扩增效果的，也就是说逆转录酶失活后，不抑制taq酶，现在请问大家：如何使50度15分钟逆转录阶段，Mg离子，taq酶，逆转录酶，在一个体系中，却又不相互影响？
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1楼2015-06-03 15:22:19
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有一个方法，你让50度是Taq酶没有活性不就好了，热启动酶 热启动吗 必须温度到达一定温度才能启动，我们用的热启动酶扩增 都是95度激活十分钟酶活才能启动啊，有很多其他的热启动酶还有激活时间七十几度的五十几度的，你只要选择95度才能激活的就能解决这个问题了
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-06-04 14:43:52
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以先逆转录在扩增啊
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-06-04 09:20:32
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cry_2013

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也觉得可以先逆转录再扩增，我们实验室现在都这么做，就是比你这个时间长点
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3楼2015-06-04 09:32:53
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zhangyep121

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-06-04 14:43:52
还有一个方法，你让50度是Taq酶没有活性不就好了，热启动酶 热启动吗 必须温度到达一定温度才能启动，我们用的热启动酶扩增 都是95度激活十分钟酶活才能启动啊，有很多其他的热启动酶还有激活时间七十几度的五十几度 ...

谢谢您，不过很遗憾，热启动酶50度是有活性的，只是没有95℃那么强
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5楼2015-06-05 13:50:31
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