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zhangyep121铜虫 (小有名气)
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[交流]
关于热启动taq酶和逆转录酶相互抑制的问题
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| 亲们，发挥大家想象力和智商的时候到了，我现在遇到一个PCR难题，跟大家讨论一下，希望大家集思广益，支支招，在做RNA类扩增的时候，发现逆转录酶对热启动taq酶存在抑制作用，这一点已经确认了，目前发现，只有在taq酶和逆转录酶都有活性的情况下，才会抑制，taq酶只有在跟Mg2+接触时，才有活性，也就是说，不遇到镁离子，taq酶是不会受逆转录酶影响的，而50度逆转录期间，taq酶一旦具有活性，就会被体系中的逆转录酶搞，影响扩增效果，但是50度时如果没接触到逆转酶，即使在95度时加入逆转录酶，是不会影响扩增效果的，也就是说逆转录酶失活后，不抑制taq酶，现在请问大家：如何使50度15分钟逆转录阶段，Mg离子，taq酶，逆转录酶，在一个体系中，却又不相互影响？ |
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