应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关信号肽的很多疑惑
51/1返回列表
查看: 6008  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)

[求助] 有关信号肽的很多疑惑 已有2人参与

大家好，本人刚接触分子生物，很多基础的东西都不太明白，请各位大神赐教啊！
就是我要把一个真核微生物的蛋白表达到酵母ppic9k这个质粒上去，因为我后续要研究这个蛋白的性质，所以想蛋白可以分泌至胞外，为了后续纯化方便，要利用His标签纯化蛋白。
1、现在ppic9k这个质粒上面有a分泌信号肽，但是我用网站分析了一下我的目的蛋白完整的CDS区域，发现它自身也有信号肽，结果是这样，我有点看不懂
# Measure  Position  Value    Cutoff   signal peptide?
  max. C    18       0.554
  max. Y    18       0.685
  max. S     1       0.922
  mean S     1-17    0.824
       D     1-17    0.760   0.450   YES
Name=Sequence        SP='YES' Cleavage site between pos. 17 and 18: VVA-QP D=0.760 D-cutoff=0.450 Networks=SignalP-noTM
然后我想问的是，他自身有信号肽的话，我想这个蛋白最后可以分泌至胞外，我是要利用它自身的信号肽分泌呢，还是利用ppic9k这个质粒上的a分泌信号肽呢？
2、如果只能利用质粒上面的a分泌信号肽的话，是不是还要去除我的目的蛋白片段上面的信号肽序列呢？但是怎么去除呢？具体操作是依靠设计引物来做吗？
3、我看很多文献上面都是采用的第一个酶切位点，这种选择是偶然的还是说一定要这么选的？是为了在用kex2酶切位点切掉a分泌信号肽之后可以少表达前面多出来的几个氨基酸序列吗？我如果选的是第二个酶切位点EcoR1和最后一个Not1可以吗？会对表达后的蛋白质的性质产生影响吗？
跪求各位大神赐教啊！！！！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-06-02 12:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shelley_

新虫 (初入文坛)
你好，我也在用ppic9k连接我的目的基因，想问一下如果利用a分泌信号肽的话，有什么亲和柱可以推荐一下吗，我查了很多资料都没有查到a分泌信号肽的亲和柱。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2016-01-04 16:30:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

calorimetry

铜虫 (正式写手)
我已经记录此问题，我想一想再答复。
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-02 12:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肉肉肉.: 金币+15 2015-06-02 17:16:40
1、要在酵母中分泌表达的话，利用ppic9k这个质粒上的a分泌信号肽，而不是你目的蛋白本身带的信号肽，因为该信号肽酵母不一定识别。
2、去除你的目的蛋白片段上游的信号肽序列，因为这是成熟蛋白不需要的，具体方法就是你说的设计引物，从第18个氨基酸的编码序列开始扩增。
3、不一定要采用的第一个酶切位点，用后面的酶切位点对分泌表达没有影响，可能的影响就是N端多了几个氨基酸残基，具体对表达后的蛋白有没有影响，因不同的蛋白而异，没有规律，所以建议，做了再说。
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-02 17:09:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-06-02 17:09:57
1、要在酵母中分泌表达的话，利用ppic9k这个质粒上的a分泌信号肽，而不是你目的蛋白本身带的信号肽，因为该信号肽酵母不一定识别。
2、去除你的目的蛋白片段上游的信号肽序列，因为这是成熟蛋白不需要的，具体方法 ...

哦哦！我懂了！但是我看到一篇关于我做的这个蛋白类型利用自身信号肽分泌的文献是成功的。现在在纠结用他自身的信号肽还是用质粒上的！
如果我用质粒上的信号肽，把本身自己的信号肽去掉的话，第18个氨基酸前面要加起始子ATG吗？
谢谢大神谢谢大神！！！
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-02 17:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +25 hualkop 2026-04-12 27/1350 2026-04-19 01:58 by 烟雨流涯
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 化学070300 求调剂 +29 哈哈哈^_^ 2026-04-12 29/1450 2026-04-18 15:56 by Equinoxhua
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考博] 求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 一志愿A区211，22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 求调剂 +3 我爱高数高数爱� 2026-04-12 3/150 2026-04-14 01:00 by 王珺璞
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭