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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么我的PCR条带长度>目的片段长度
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merry2004120

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by fMssop at 2015-05-23 18:52:29
提取的RNA中混有一定量的基因组DNA，这是不可避免的问题，RNA中或多或少都会有一定量的DNA存在，当你需要的那段基因表达特别低或者干脆不表达的时候，便会以DNA为模板而不是RNA了。所以，楼主可以上网查查，看看文献 ...

胶的浓度需要加大吗？电压120v应该降低吗？
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11楼2015-05-23 22:13:31
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fMssop

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by merry2004120 at 2015-05-23 22:13:31
胶的浓度需要加大吗？电压120v应该降低吗？...

我们实验室采用1%浓度的胶，电压微高，110伏吧。最好是加大上样量
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12楼2015-05-24 23:01:09
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
扩增真核生物的mRNA或者cDNA时，为了防止扩增出gDNA对应的片段，通常情况下设计引物需要跨外显子设计，避免gDNA的扩增
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rainwater
13楼2015-05-25 12:37:41
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也跑成这样过，想问下，你电泳液多久没换了？你胶配置多久了？
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努力打败一切
14楼2015-05-25 14:12:04
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merry2004120

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yangjingjing at 2015-05-25 14:12:04
我也跑成这样过，想问下，你电泳液多久没换了？你胶配置多久了？

今天重换了电泳液，同样有拖尾现象。胶每次电泳都是新配的。
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15楼2015-05-25 20:51:32
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merry2004120

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhangyunjing at 2015-05-25 12:37:41
扩增真核生物的mRNA或者cDNA时，为了防止扩增出gDNA对应的片段，通常情况下设计引物需要跨外显子设计，避免gDNA的扩增

引物是文献上查到的，而且有人以前P出来过
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16楼2015-05-25 20:53:11
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by merry2004120 at 2015-05-25 20:51:32
今天重换了电泳液，同样有拖尾现象。胶每次电泳都是新配的。...

那你要不要重新配置TAE啊？一定是这个的问题了
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努力打败一切
17楼2015-05-26 12:47:18
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