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wenwen王

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[求助] 荧光定量PCR的溶解曲线是倒着的，原因可能是什么？已有1人参与

做某个基因的荧光定量PCR，目的基因的溶解曲线是倒着的，内参基因的溶解曲线是正着的。原因是什么？

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1楼 2015-05-18 15:15:19

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【答案】应助回帖

你这熔解曲线的条件设置有问题。先高温在低温随后缓慢升温，在升温的过程中测量荧光信号的变化。溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况，我们实验室用BIOGHC -PCR检测了DNA,如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现，这就证明没有非特异性扩增，且初始模板没有被污染；如果出现多个峰，估计是有非特异性扩增了或者初始模板被污染了。

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