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十分想念

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
帖子: 4
在线: 6小时
虫号: 3743480
注册: 2015-03-16
性别: MM
专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] 实时荧光定量PCR之标准曲线的制作已有2人参与

新手做实时定量PCR，好多东西不懂，大家帮忙看下，我是从标准曲线做起的，前面几次都是做的10个浓度梯度，这一次做的样分别是无菌水空白，180pg/uL的质粒标准品，1.8ng/uL的质粒标准品，但是每个实验一样的情况：无论是水，还是标准品，不论浓度梯度，所有的CT都是25左右，根本没有任何区别，这是为什么啊？求指导

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加油

1楼 2015-05-18 10:01:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 21.2
散金: 10
帖子: 10
在线: 1.6小时
虫号: 6580039
注册: 2017-05-22
专业: 植物病理学

引用回帖:

8楼: Originally posted by 大头妞妞 at 2017-03-13 21:49:40
你好，我想请问一下，如果我的质粒标准品和水阴性对照样品，跑出来的标准曲线看到有两个峰就说明是我的引物有问题，是这样吗？为什么啊，可是我的引物用来做PCR特异性检测，水作为阴性对照也没扩出条带啊，可以解释 ...

新手上路，请问楼主标准曲线的绘制必须构建质粒作为标准品吗？
可以用提取的DNA直接割胶纯化获得吗？

发自小木虫Android客户端