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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ssssnns(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-05-15 19:36:58
弱弱的问一下LZ，你延伸用了多长时间，酶是什么酶，要扩多长的序列。之前提的基因组检测过了没，浓度多大？你用的Marker最大量程是多大？
我不觉得中间那两条亮带是基因组，有点像多聚物的感觉，引物设计有什么问题吗，需要扩增的序列有没有什么特殊的地方？这十几个孔扩增的是不同的序列吗？
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大家相互帮助哈
11楼2015-05-13 15:03:05
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ssssnns

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-13 15:03:05
弱弱的问一下LZ，你延伸用了多长时间，酶是什么酶，要扩多长的序列。之前提的基因组检测过了没，浓度多大？你用的Marker最大量程是多大？
我不觉得中间那两条亮带是基因组，有点像多聚物的感觉，引物设计有什么问题 ...

普通Taq酶，扩增400多bp，第二阶段延伸40s，最后一阶段7min，marker4μ，引物经过pp6和Oligo分析过。同一对引物，扩不同细菌的某一基因

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12楼2015-05-13 21:20:30
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ssssnns

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-13 15:03:05
弱弱的问一下LZ，你延伸用了多长时间，酶是什么酶，要扩多长的序列。之前提的基因组检测过了没，浓度多大？你用的Marker最大量程是多大？
我不觉得中间那两条亮带是基因组，有点像多聚物的感觉，引物设计有什么问题 ...

之前基因组检测过的

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13楼2015-05-13 21:21:17
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ssssnns at 2015-05-13 21:21:17
之前基因组检测过的
...

那就将模板稀释10到100倍再扩增一下试试，应该是你模板加的太多了
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大家相互帮助哈
14楼2015-05-13 21:34:32
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五维度的爱

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因组稀释后再做模板
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15楼2015-05-14 10:58:26
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hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
20-50ng  模板  就好了，不要太多···
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16楼2015-05-15 12:43:09
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ssssnns

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 五维度的爱 at 2015-05-14 10:58:26
基因组稀释后再做模板

好的

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17楼2015-05-15 13:22:11
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ssssnns

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-05-15 12:43:09
20-50ng  模板  就好了，不要太多···

好的

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18楼2015-05-15 13:22:19
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pcr条件设置正确了吗
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19楼2015-05-15 18:46:46
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ssssnns

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by wang2568 at 2015-05-15 18:46:46
pcr条件设置正确了吗

正确

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20楼2015-05-16 14:16:23
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