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匿名

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11楼2015-05-12 14:11:13

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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

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11楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 14:11:13
这样个试剂盒去gc含量高的好用吗...

这个就不是很清楚了，没有试过你那么高GC的，做过GC含量为70%左右的，效果还不错；你可以额外添加一些降低解链温度的PCR添加剂到PCR反应体系中，比如betaine和DMSO等。

rainwater

12楼2015-05-12 16:08:29

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18761615793

木虫 (正式写手)

引用回帖:

8楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 13:53:32
什么酶呢...

LA

13楼2015-05-12 17:11:51

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18761615793

木虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 13:57:25
引物不管怎么设计，都是在65℃的tm值，一直在做温度的梯度...

那你主要在buffer和酶吧，这两方面入手

todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful

14楼2015-05-12 17:12:25

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zeroon

木虫 (正式写手)

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根据这个情况，用Takara的 PrimeStar GXL DNA Polymerase ，这个对长片段和高GC含量的很有效果

15楼2015-05-12 18:45:37

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花伦小丸子

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我也用GXL,效果真的很好

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16楼2015-05-12 19:21:53

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duolin1986

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费那劲？不如全基因合成去。想要什么全部合成就Ok了。

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17楼2015-05-13 14:09:14

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a13515517892

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3楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 12:15:39
那个buffer是什么。。。没怎么听过啊...

通俗名字叫高GC buffer，你问卖试剂的人员应该知道的

18楼2015-05-14 10:43:51

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feng890327

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3楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 12:15:39
那个buffer是什么。。。没怎么听过啊...

高GCbuffer，或者加入一点DMSO，同时提高变性和退火的温度

19楼2015-05-14 10:49:04

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feng890327

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加入一点DMSO，有助于降低解链温度，同时提高变性和退火的温度

20楼2015-05-14 10:51:14

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