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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助一个10k的pcr问题
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匿名

用户注销 (小有名气)
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11楼2015-05-12 14:11:13
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★
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11楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 14:11:13
这样个试剂盒去gc含量高的好用吗...

这个就不是很清楚了，没有试过你那么高GC的，做过GC含量为70%左右的，效果还不错；你可以额外添加一些降低解链温度的PCR添加剂到PCR反应体系中，比如betaine和DMSO等。
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rainwater
12楼2015-05-12 16:08:29
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18761615793

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 13:53:32
什么酶呢...

LA
13楼2015-05-12 17:11:51
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
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9楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 13:57:25
引物不管怎么设计，都是在65℃的tm值，一直在做温度的梯度...

那你主要在buffer和酶吧，这两方面入手
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
14楼2015-05-12 17:12:25
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zeroon

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
根据这个情况，用Takara的  PrimeStar GXL DNA  Polymerase ，这个对长片段和高GC含量的很有效果
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15楼2015-05-12 18:45:37
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花伦小丸子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也用GXL,效果真的很好

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16楼2015-05-12 19:21:53
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duolin1986

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
费那劲？不如全基因合成去。想要什么全部合成就Ok了。

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17楼2015-05-13 14:09:14
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a13515517892

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 12:15:39
那个buffer是什么。。。没怎么听过啊...

通俗名字叫高GC buffer，你问卖试剂的人员应该知道的
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18楼2015-05-14 10:43:51
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feng890327

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱六弦的肆贤 at 2015-05-12 12:15:39
那个buffer是什么。。。没怎么听过啊...

高GCbuffer，或者加入一点DMSO，同时提高变性和退火的温度
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19楼2015-05-14 10:49:04
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feng890327

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加入一点DMSO，有助于降低解链温度，同时提高变性和退火的温度
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20楼2015-05-14 10:51:14
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