24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3024  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xmccphx

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] PCR产物加尾之后连接载体的问题 已有5人参与

使用TOYOBO公司的KOD FX酶扩增大约2.5kb的目的片段,由于要连到PMD-19T载体上,需要对PCR产物加尾。以下是我的实验步骤,请教一下有没有问题:
①PCR产物跑胶后切胶回收;②将回收的产物使用rTAQ酶体系72℃水浴保温30min加尾,③加尾后的产物4ul,soultion I 5ul,PMD-19T simple 1ul,混合后16℃水浴过夜。 连接之后的产物跑胶后发现片段大小只是原来扩增的片段,请问是哪里出问题了?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmccphx

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

???????:
2?: Originally posted by ?????11 at 2015-05-11 22:46:06
????K????????z??????A???????????PCR?w????Aβ

?????PCR?????β????
5楼2015-05-12 22:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

随风飘摇11

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
????K????????z??????A???????????PCR?w????Aβ

[ ????С??????? ]
天道酬勤
2楼2015-05-11 22:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

专家顾问

小虫

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
链接之后的产物跑胶?是指连接PMD-19T载体之后跑胶大小还是加尾后跑胶啊,链接载体后跑胶,引物不变扩增的片段当然不变了
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-05-12 09:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
连接后10ul的体系做检测还能检测出基因那说明LZ的基因浓度不低,那跑胶能看到T载体的带吗?
其实我建议LZ就拿这个体系做一下转化试试运气,因为本身在常规buffer下rTaq加A效率就不高,估计有连上T载体的但是达不到琼脂糖凝胶的分辨率你肉眼看不到而已,连出来空载可能会比较多。
要想提高rTaq的加A效率,可以把dNTP换成dATP,用rTaq,其他体系不变,连接72度30min——60min。
大家相互帮助哈
4楼2015-05-12 16:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学279求调剂 +12 哈哈哈^_^ 2026-03-31 14/700 2026-04-01 11:11 by chemdavid
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突, 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 初试301,代码085701环境工程,本硕一致,四六级已过,有二区一作,共发表5篇论文 +3 axibli 2026-04-01 3/150 2026-04-01 08:43 by i_cooler
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 330分求调剂 +6 qzenlc 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:44 by Wang200018
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 一志愿华中师范化学332分求调剂 +3 Lyy930824@ 2026-03-29 3/150 2026-03-30 20:15 by DHUSHUAI
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 339求调剂,想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 一志愿吉大071010,316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
信息提示
请填处理意见