| 查看: 3022 | 回复: 12 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
PCR产物加尾之后连接载体的问题 已有5人参与
|
||
|
使用TOYOBO公司的KOD FX酶扩增大约2.5kb的目的片段，由于要连到PMD-19T载体上，需要对PCR产物加尾。以下是我的实验步骤，请教一下有没有问题： ①PCR产物跑胶后切胶回收；②将回收的产物使用rTAQ酶体系72℃水浴保温30min加尾，③加尾后的产物4ul，soultion I 5ul，PMD-19T simple 1ul，混合后16℃水浴过夜。 连接之后的产物跑胶后发现片段大小只是原来扩增的片段，请问是哪里出问题了？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有172人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求赐教，扩增3000bp片段是用高保真Taq酶好，还是用高保真再加A尾好一点？
已经有27人回复
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- PCR产物连T载体转化后，阳性率低
已经有9人回复
- pcr产物末端加A问题
已经有23人回复
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体
已经有13人回复
- 平末端加A尾连接T载体的问题
已经有14人回复
- 关于构载体过程中PCR验证正确但是测序为空载体的困惑
已经有7人回复
- 片段总是连不到T载体上
已经有22人回复
- 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
已经有16人回复
- pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接
已经有16人回复
- 大侠们，帮我看一下这对引物的酶切位点是什么？
已经有20人回复
- PCR片段与载体连接不上
已经有6人回复
- 急!要连表达载体的目的片段可以是PCR后回收的产物吗？已经连中间载体验证过了
已经有3人回复
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- PCR产物与T载体连不上 求助
已经有29人回复
- 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】PCR产物A加尾
已经有15人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
18761615793
超级版主
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
3楼2015-05-12 09:08:01
随风飘摇11
版主
- 应助: 92 (初中生)
- 金币: 2284.9
- 散金: 606
- 红花: 53
- 帖子: 2249
- 在线: 818.5小时
- 虫号: 1146270
- 注册: 2010-11-14
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2015-05-11 22:46:06
luwei13566
超级版主
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4351.4
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2015-05-12 16:56:42
5楼2015-05-12 22:59:18
