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853517161

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR鉴定阳性,双酶切无结果。 已有1人参与

小弟最近刚刚接触质粒构建,打算将约800bp的目的基因与PB—IFlag载体构建成一个重组质粒,用的是Xhol及BglII双酶切,细胞转化时用的是DH-5α大肠杆菌。用菌液PCR鉴定目的基因时显示阳性,但用相同的两种酶进行双酶切时却切出了一个大约2000bp的片段,做了2遍结果一样,实在是想不通,特来此求大神指点!
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zhuimeng54

新虫 (初入文坛)

我也遇到了相同的情况,我从菌液抽出的质粒进行PCR时也P出了目的条带,但就是酶切后检测不到目的基因

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-26 13:17:04
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先菌液PCR有可能有假阳性,这个比较正常,菌液PCR只是一种作为预选的方案。不知道你的菌液PCR引物用的是只有目的基因的还是一段目的基因一段载体上的,建议用一段载体一段目的基因的引物组合。因为不知道你所用载体的大小,不知道2000bp是什么......
3楼2015-11-27 00:58:53
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