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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 菌液PCR鉴定阳性，双酶切无结果。
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853517161

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR鉴定阳性，双酶切无结果。 已有1人参与

小弟最近刚刚接触质粒构建，打算将约800bp的目的基因与PB—IFlag载体构建成一个重组质粒，用的是Xhol及BglII双酶切，细胞转化时用的是DH-5α大肠杆菌。用菌液PCR鉴定目的基因时显示阳性，但用相同的两种酶进行双酶切时却切出了一个大约2000bp的片段，做了2遍结果一样，实在是想不通，特来此求大神指点！
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1楼 2015-05-08 22:33:57
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zhuimeng54

新虫 (初入文坛)
我也遇到了相同的情况，我从菌液抽出的质粒进行PCR时也P出了目的条带，但就是酶切后检测不到目的基因

发自小木虫Android客户端
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2楼2015-11-26 13:17:04
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先菌液PCR有可能有假阳性，这个比较正常，菌液PCR只是一种作为预选的方案。不知道你的菌液PCR引物用的是只有目的基因的还是一段目的基因一段载体上的，建议用一段载体一段目的基因的引物组合。因为不知道你所用载体的大小，不知道2000bp是什么......
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3楼2015-11-27 00:58:53
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