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一个不小心就

金虫 (正式写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

[求助] p不出目标片段已有3人参与

提取16sDNA。20微升pcr的时候得到了目的片段。于是那pcr产物继续pcr，体系按比例扩大成50微升。但这时p不出条带了。如图：右边是marker，目标1500bp片段应平行于marker第三个条带。

IMG_20150507_002115.JPG

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1楼 2015-05-07 00:23:49

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-05-07 13:16:39
PCR产物再次PCR，问题就有很多，但最重要的原因还是从模板考虑。一次产物的模板要进行鉴定在二次P，模板浓度要稀释100-1000倍，而且二次PCR本身极易产生错配，引物搞不好会新村二聚体，所以使用特异性高的试剂盒扩增 ...

确实是模板的问题。现在成功了。有意思的是，我的胶回收后的产物浓度已经比较低了，10ng/μl以内，居然还是p不出来。