应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切问题。急急急！
81/1返回列表
查看: 1204  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

青苹果QT

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切问题。急急急！已有6人参与

请问大家有没有遇到过这样的情况：
提质粒跑电泳是有条带的。但是酶切过后什么也没有？
求教！求教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2015-05-05 09:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
检查下你的酶切体系是否合适。内切酶是否失效。
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-05 10:14:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2015-05-05 10:23:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-05 16:24:22
有可能有如下问题：体系是否正确，酶切时间是否过长以至于切碎了，看下图谱是否单一酶切位点，特别需要注意的是需要看看你的酶是快酶还是慢酶，需要什么样的Buffer，是否有星号活性等等，排除了这些因素应该就没问题。我觉得如果是快酶的话，载体有1-2ug就行，酶切30min即可。
赞一下 回复此楼
科研炮灰
4楼2015-05-05 10:28:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-05 16:24:27
酶切体系没有问题的话，考虑酶切的量是否有问题，质粒定量是否有问题，可能量少电泳看不到
赞一下 回复此楼
好好生活，努力赚钱
5楼2015-05-05 15:04:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aesar9983

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用同样的体系不加任何限制性内切酶，加质粒，保温1h是否质粒还是不见？
如果是这样的话，说明提的质粒里核酸内切酶没有除干净
用来提质粒的菌是否是EndA+的菌？如BL21
有的试剂盒质量不稳定是会造成核酸内切酶污染的
简便的办法是提完质粒后，在70°C水浴10-15分钟让核酸内切酶变性失活
再不行换试剂盒吧
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-05 16:32:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzb1933

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cckk_2000 at 2015-05-05 10:28:14
有可能有如下问题：体系是否正确，酶切时间是否过长以至于切碎了，看下图谱是否单一酶切位点，特别需要注意的是需要看看你的酶是快酶还是慢酶，需要什么样的Buffer，是否有星号活性等等，排除了这些因素应该就没问题 ...

什么是快酶和慢酶，我用Er I和Bi I双酶切，切了4个小时，结果没有条带了
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-16 15:05:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人车

木虫 (正式写手)
我昨天做也是 酶切之前条带很好 之后就没有了 也不知道什么原因 打算再做一次试试
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-17 09:02:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 青苹果QT 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭