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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切问题。急急急！
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切问题。急急急！ 已有6人参与

请问大家有没有遇到过这样的情况：
提质粒跑电泳是有条带的。但是酶切过后什么也没有？
求教！求教!
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1楼 2015-05-05 09:09:34
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
检查下你的酶切体系是否合适。内切酶是否失效。
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2楼2015-05-05 10:14:55
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nemo88

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2015-05-05 10:23:01
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-05 16:24:22
有可能有如下问题：体系是否正确，酶切时间是否过长以至于切碎了，看下图谱是否单一酶切位点，特别需要注意的是需要看看你的酶是快酶还是慢酶，需要什么样的Buffer，是否有星号活性等等，排除了这些因素应该就没问题。我觉得如果是快酶的话，载体有1-2ug就行，酶切30min即可。
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科研炮灰
4楼2015-05-05 10:28:14
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380218013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-05 16:24:27
酶切体系没有问题的话，考虑酶切的量是否有问题，质粒定量是否有问题，可能量少电泳看不到
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好好生活，努力赚钱
5楼2015-05-05 15:04:16
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aesar9983

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用同样的体系不加任何限制性内切酶，加质粒，保温1h是否质粒还是不见？
如果是这样的话，说明提的质粒里核酸内切酶没有除干净
用来提质粒的菌是否是EndA+的菌？如BL21
有的试剂盒质量不稳定是会造成核酸内切酶污染的
简便的办法是提完质粒后，在70°C水浴10-15分钟让核酸内切酶变性失活
再不行换试剂盒吧
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6楼2015-05-05 16:32:02
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wzb1933

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cckk_2000 at 2015-05-05 10:28:14
有可能有如下问题：体系是否正确，酶切时间是否过长以至于切碎了，看下图谱是否单一酶切位点，特别需要注意的是需要看看你的酶是快酶还是慢酶，需要什么样的Buffer，是否有星号活性等等，排除了这些因素应该就没问题 ...

什么是快酶和慢酶，我用Er I和Bi I双酶切，切了4个小时，结果没有条带了
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7楼2015-06-16 15:05:59
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人车

木虫 (正式写手)
我昨天做也是 酶切之前条带很好 之后就没有了 也不知道什么原因 打算再做一次试试
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8楼2015-06-17 09:02:26
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