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慕辰sherry

新虫 (初入文坛)

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[求助] 请教直接测序和克隆测序的问题已有3人参与

之前已经求助过一次了。做cDNA全长验证，引物设计的都可以，最后跑胶的结果也还行，就是直接测序的结果很纠结。我的cDNA全长是1200bp左右，直接测序得到的差不多是920bp，而且在MEGA软件中作变异位点分析是发现有35个变异位点。。。

我之前用的是rtaq酶，请问是换一种酶做还是直接克隆测序。谢谢。

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1楼 2015-04-29 15:07:55

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慕辰sherry

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引用回帖:

5楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-10 19:15:51
建议克隆测序，你这个情况不要直接测序

直接测序用的是你的引物，起始及结尾30bp之内可信度很差，要使用这个结果比较需要删除掉。。。
如果你是用的一个方向的引物单向测序，那基本800bp以后的就别考虑了具体 ...

做了一次直接测序，我扩的有1500bp左右，测序结果只有950bp，现在送生工克隆测序了，等结果出来了我在上来请教。谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]