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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于图位克隆的一点疑惑

大家好:我最近看了些图位克隆的资料,我有一个问题,那就是对于已经测序的物种,在已有标记无法进一步缩小距离的情况下,如何设计新的标记,,如CAPS和Indel标记,如何利用数据库中的数据设计?我要克隆的序列不是未知的吗?那如何设计引物啊?求大侠讲解下吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lwk5716: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢你的回答! 2015-04-26 15:18:20
lwk5716: 金币+12, ★★★很有帮助 2015-04-28 11:49:59
你用的两个亲本如果都有测序的数据了,可以比对定位的区域中的序列差异来设计Indel或CAPS差异。如果没有,那么只能根据参考品种的序列设计STS引物扩增后电泳,看你运气,有的物种InDel比例高,有的低。也可以把2个品种的PCR产物直接测序,看看有没有设计内切酶位点的SNP,有的话,就是一个CAPS标记。做SNP把握更大一些。
2楼2015-04-26 12:54:32
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-26 12:54:32
你用的两个亲本如果都有测序的数据了,可以比对定位的区域中的序列差异来设计Indel或CAPS差异。如果没有,那么只能根据参考品种的序列设计STS引物扩增后电泳,看你运气,有的物种InDel比例高,有的低。也可以把2个品 ...

我将来可能会做玉米的图位克隆,但是是地方品种,不是测序的那个品种,看来只能参考测序的品种序列了。
3楼2015-04-26 15:20:42
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-26 12:54:32
你用的两个亲本如果都有测序的数据了,可以比对定位的区域中的序列差异来设计Indel或CAPS差异。如果没有,那么只能根据参考品种的序列设计STS引物扩增后电泳,看你运气,有的物种InDel比例高,有的低。也可以把2个品 ...

我还有一个问题想请教一下,用2个品种的PCR产物去测序,那么已有标记之间要是间隔的碱基数比较多的话,PCR要设计多长的片段合适?
4楼2015-04-27 20:49:53
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yingheqian

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lwk5716 at 2015-04-27 20:49:53
我还有一个问题想请教一下,用2个品种的PCR产物去测序,那么已有标记之间要是间隔的碱基数比较多的话,PCR要设计多长的片段合适?...

这个靠运气,也看物种,我们蚕里面检测出PCR长度多态的STS标记比例只有10%左右。测序出来的SNP有50%左右。我们一般设计引物可以扩展800bp左右的PCR产物,刚好一个测序反应基本可以测通。
5楼2015-04-27 21:27:48
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-27 21:27:48
这个靠运气,也看物种,我们蚕里面检测出PCR长度多态的STS标记比例只有10%左右。测序出来的SNP有50%左右。我们一般设计引物可以扩展800bp左右的PCR产物,刚好一个测序反应基本可以测通。...

谢谢你!
6楼2015-04-28 13:21:43
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88mc

木虫 (小有名气)

我们也是做玉米的,之前也是利用参考序列,但是难找到能用的标记,后来好像是川农对17个玉米自交系进行重测序,并且设计了很多SSR标记,你可以寻找跟你材料血缘比较近的材料进行参考,自己设计引物或者利用他们现成的筛一下,有多态性的标记还是很多的。那个你可以吧你的邮箱发给我,我把那个序列分析表发给你,小木虫我不会上传文件
7楼2015-07-26 10:10:27
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 88mc at 2015-07-26 10:10:27
我们也是做玉米的,之前也是利用参考序列,但是难找到能用的标记,后来好像是川农对17个玉米自交系进行重测序,并且设计了很多SSR标记,你可以寻找跟你材料血缘比较近的材料进行参考,自己设计引物或者利用他们现成 ...

太谢谢你了,我的邮箱是lwk5716@163.com
8楼2015-07-27 21:39:05
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