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juan_819

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1092992
注册: 2010-09-08
专业: 中药资源

[求助] 本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长。。。已有4人参与

我已经设计了两对引物。第一对做的不太成功。第二对今天早上做了一下可以扩出来一些。在1500bp附近有我需要的目的基因，但是我用早上的产物做二次扩增的时候却怎么也做不出来了。只有引物二聚体。想问一下，如果改用LAtaq酶会不会效果好一些，在引物、镁离子等浓度上有什么需要注意的地方，希望各位指点一下，谢谢。

上午做梯度的结果

用第四第五管做二次pcr的结果

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1楼 2015-04-15 16:44:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

慕辰sherry

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 196.5
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虫号: 3811788
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专业: 中药资源

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

引用回帖:

13楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-16 08:57:30
目前用的是什么酶？不建议使用LA Taq酶，因为它专门针对长片段（起码也得8kb以上），你现在是1500bp不算长片段，扩增效果可能会适得其反，（当然成功也有可能，毕竟是分子实验看不见摸不着的）
建议可以尝试降落P ...

现在用的是rtaq酶。我做过梯度了，50-60之间。因为设计引物的时候，两个都在60度左右。第一张图就是我做梯度的结果。就是扩出来的目的片段很淡，我不知道怎么优化条件

[ 发自小木虫客户端 ]