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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[求助] DNA如何定量? 已有2人参与

对分子生物学了解不多,属于菜鸟,想咨询一下怎么样才能准确检测DNA的量,不是定性。
  如果是提取的DNA被活性炭吸附了,如何检测被活性炭吸附到表面的DNA的量呢?
   希望各位专家多提指导意见呀,谢谢!
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周华瑞safari

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-04-10 09:23:24
guoxingjun2008: 金币+2 2015-04-15 16:43:44
guoxingjun2008: 金币+6 2015-04-15 16:45:51
可以用定磷法
磷的测定方法很多,Fiske-Subbarow定磷法是一经典的但至今仍被经常采用的方法,它具有灵敏、简便的特点。各种含磷有机物经硫酸或过氯酸水解,使有机磷消化成为无机磷。无机磷在酸性条件下,与钼酸盐(常用钼酸铵或钼酸钠)反应生成磷钼酸盐络合物。用还原剂处理,磷钼酸盐络合物被还原生成钼蓝,在660nm处有最大光吸收峰。在一定浓度范围内,颜色的深浅与磷含量成正比关系。因此可应用分光光度法进行磷的定量测定核酸是一类含磷化合物,其分子含有一定比例的磷,一般纯的RNA及其核苷酸含磷质量分数为9.0%;DNA及其核苷酸含磷质量分数为9.2%,即每100g核酸含有9.0~9.2g磷,也就是核酸量是含磷量的11倍左右,故测得磷的量,即可求得核酸量。这就是定磷法的理论依据,磷的定量测定是测定核酸含量常用手段之一。
2楼2015-04-09 12:52:58
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-10 09:23:29
直接测定浓度就好了嘛,微量分光光度计,1—2微升就测出浓度了,单位是ng/uL,根据体积就算出DNA量了啊
没有做不到,只有想不到!
3楼2015-04-09 16:41:06
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 周华瑞safari at 2015-04-09 12:52:58
可以用定磷法
磷的测定方法很多,Fiske-Subbarow定磷法是一经典的但至今仍被经常采用的方法,它具有灵敏、简便的特点。各种含磷有机物经硫酸或过氯酸水解,使有机磷消化成为无机磷。无机磷在酸性条件下,与钼酸盐( ...

您的意思是把活性炭浸泡于硫酸或氯酸中,让活性炭表面的DNA水解成无机磷?这种硫酸的浓度是多少?浓硫酸吗?消化多长时间?谢谢
4楼2015-04-15 16:45:39
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