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wuwenmei新虫 (小有名气)
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[求助]
关于真核生物表达系统的一些问题 已有2人参与
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| 我要表达的目的序列大概200多个bp.是一个富含二硫键的蛋白质，以前有人对这个蛋白做过这个研究，是在原核生物表达系统中利用SUMO构建重组蛋白，但是是包涵体，要蛋白质复性，蛋白质复性就面对着失活，那我应该怎么做？可以放进真核生物表达系统中做吗？老板让我找一个分泌性表达载体做，他希望不需要超声破碎，可以分泌到培养基中，或者上清中，我应该怎么下手？我怎么感觉这就是一个坑，哎，谁能帮我解答下呀，最后，想问下哪一个真核生物表达系统适合做我的表达系统，我怎么选择哪一个？有做过真核生物表达系统的大牛吗？希望能解答下，谢谢， |
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6楼2015-03-27 15:23:12
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-03-28 16:24:45
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-03-28 16:24:45
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是个坑。我也解答不了你这个问题。 我们实验室也是有个蛋白，原核表达不成功后老板让我进行真核表达。但是因为实验室穷，不可能做瞬时转染。所以筛选稳定株。但是稳定株做出来后蛋白表达量很低，过柱子纯化不下来。 所以我现在又掉头做原核表达，我找了一些其他载体。除了sumo,nus,gst的我都进行尝试。现在质粒已经成功，开始要小量表达纯化，想到过柱子，切标签过柱子之后蛋白还不知道有没有活性我就犯愁啊。 我们学院新来了一个老师，做起真核表达可是刷刷的。不禁感慨隔行如隔山，有没有人带着差别可真大。 真核表达就是比较费钱。只要舍得花钱。 转染试剂一转染个五六十皿，细胞裂解液还带走蛋白酶体抑制剂的一保护，买最贵的纯化柱子一纯化，就爽了。 [ 发自小木虫客户端 ] |
2楼2015-03-26 23:28:47
wuwenmei
新虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1472.1
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- 帖子: 280
- 在线: 54.9小时
- 虫号: 3114800
- 注册: 2014-04-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2015-03-26 23:42:04
4楼2015-03-27 01:12:19
