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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 谁知道 用 triton x-100 低浓度时 会破坏细胞核么？
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356163976

金虫 (小有名气)

[求助] 谁知道 用 triton x-100 低浓度时 会破坏细胞核么？已有3人参与

我想破坏细胞质膜等， 就是保留细胞核， 其他的全部破坏掉。  应该用什么裂解掖好？   使用 triton 低浓度时，  能不能只破坏细胞膜等，但是 不破坏细胞核？
另外 triton本身能完全裂解细胞么，比如高浓度 ，也能破坏细胞核么？

希望 内行人解答，谢谢！ 本人没经验。。。
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1楼2015-03-17 23:05:58
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356163976

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zjf710 at 2015-03-19 01:38:51
应该问题不大。可以碾磨后，用含0.1%的SDS的缓冲液洗脱，可能效果更好些。摸条件试试，在显微镜下观察细胞核，作为评价指标。...

顺便说下，我还用超声试了下， 很低平率，  就是细胞破碎那个匀浆机之类的，
但是感觉好像超声过头了，导致离心后，上清夜混浊也有点药物颜色， 此外沉淀量也减少了。

我想问的是，比如一百万个细胞 离心大概沉淀有体积V1, 那么细胞破碎，去掉细胞膜等，只留下细胞核， 离心下来的细胞核 体积难道 目测也和 v1差不多大么？还是应该小不少？  因为我不知道是不是本身把细胞核破坏掉了部分，导致离心沉淀变小了， 还是细胞核就应该体积变小了？
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10楼2015-03-19 08:40:05
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zjf710

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-03-22 09:55:30
Triton x-100会破坏所有的膜结构，所以你想破坏细胞膜，不损伤核膜，最好使用碾磨法破细胞膜。
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三人行，必有我师焉
2楼2015-03-18 02:49:15
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356163976

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zjf710 at 2015-03-18 02:49:15
Triton x-100会破坏所有的膜结构，所以你想破坏细胞膜，不损伤核膜，最好使用碾磨法破细胞膜。

我想用很低浓度triton会不会好点？ 通常你用多少浓度破坏细胞， 1%？ 0。1%？
但是如果降低到0.02%之类或者更低， 会不会好点？ 因为 用研磨法，会造成细胞膜的大碎片也会随着细胞核一起离心下来把，这样细胞核就不纯了，我想加点triton会不会溶解掉膜，就不会离心下来了，  你觉得呢？
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3楼2015-03-19 01:06:46
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zjf710

金虫 (著名写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-22 09:57:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by 356163976 at 2015-03-19 01:06:46
我想用很低浓度triton会不会好点？ 通常你用多少浓度破坏细胞， 1%？ 0。1%？
但是如果降低到0.02%之类或者更低， 会不会好点？ 因为 用研磨法，会造成细胞膜的大碎片也会随着细胞核一起离心下来把，这样细胞核就 ...

应该问题不大。可以碾磨后，用含0.1%的SDS的缓冲液洗脱，可能效果更好些。摸条件试试，在显微镜下观察细胞核，作为评价指标。
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三人行，必有我师焉
4楼2015-03-19 01:38:51
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