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2016zhu

新虫 (初入文坛)

[求助] 免疫亲和柱偶联抗体后无法截获标准品已有1人参与

我在做农药的免疫亲和柱时,为什么在Sepharose 4B上偶联抗体后,却无法捕获标准品?
    是不是抗体灵敏度太低了,就一定捕获不了标准品么?我的抗体灵敏度是2ppm左右,不管加多少抗体偶联免疫亲和柱,无论用5ppm还是0.5ppm标准品过柱子回收率都和不联抗体的空白柱子一样,这貌似是非特异性吸附吧。难道抗体一点作用都不起么?
    该怎么解决啊,谢谢大家了
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2016zhu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Amanda燕尾蝶 at 2015-03-28 10:54:03
可以测测抗体偶联率,确定下到底抗体联没连上,连上多少。

抗体偶联率很高,每次都测过。您说会不会是抗体灵敏度太差,就一定捕获不了么?
4楼2015-03-29 16:31:52
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Amanda燕尾蝶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


2016zhu: 金币+1, 抗体灵敏度低就一定捕获不了么?抗体偶联率很高,每次偶联都会测偶联率的 2015-03-29 16:33:02
抗体灵敏度低有影响。
你确定抗体偶联上胶了吗?
会不会洗脱太过了?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我自横刀向天笑,笑完我就去睡觉。
2楼2015-03-28 10:51:37
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Amanda燕尾蝶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以测测抗体偶联率,确定下到底抗体联没连上,连上多少。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我自横刀向天笑,笑完我就去睡觉。
3楼2015-03-28 10:54:03
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2016zhu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Amanda燕尾蝶 at 2015-03-28 10:54:03
可以测测抗体偶联率,确定下到底抗体联没连上,连上多少。

抗体偶联率都测过,偶联率很高,但是就是捕获不了
5楼2015-03-29 16:38:01
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