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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交AD载体构建已有4人参与

通过酵母双杂交筛选到互作蛋白,目前正在构建AD载体,其中photosystem I assembly protein Ycf4和TRAF transcription factor这两个基因,克隆测序后,酶切后与pGADT7连接,跑胶检测存在目的条带(连接应该没有问题),连接产物10ul转化全式金公司大肠杆菌感受态,冰浴40min;42°,60S;冰浴2.5min,SOC恢复培养1h,100ul涂氨苄抗性平板,过夜培养约14h,有克隆长出,而且存在大量类似于未涂均匀的菌落,菌液PCR检测无阳性克隆。重复几次怀疑是感受态有问题,又做了转化puc19和pGADT7的阳性对照,菌落生长情况与前面情况相同,请见图。目前怀疑抗生素有问题,烦请各位高手帮忙分析下可能存在的原因,感激,

酵母双杂交AD载体构建
control.jpg


酵母双杂交AD载体构建-1
pGADT7.jpg


酵母双杂交AD载体构建-2
YCF4.jpg


酵母双杂交AD载体构建-3
TRAF.jpg
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金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
faile18: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-03-01 09:56:31
新倒班吧  Amp没工作

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2015-03-01 09:05:08
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