24小时热门版块排行榜    

查看: 1547  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xzhfood

荣誉版主 (著名写手)

[求助] 重叠PCR引物设计 已有1人参与

片段1
TATAGGGAGAGGATCCCCCGCCGGCCACAGCGGCGGCCGGGTGGTCGATAAGGCGTCGCCCGGATTCTTCGGGATCTATACGGTCGGGGTGGCCAGTCCTGCTGTTGCCGGGCACGCGAGTGTCCGGCCCTCCGAGGTGCGGTGGTTGTGGTGAGAAGCACGTACCTGTACCGGGTGCTGAAGGCGAGCTGGGGTGTGCGCGTGCTCCTGGGCGCCGAGGCCCGCGGCGGCACGCCGGAACCCGATGCGGTGGCCGTGGCGGACGGCCTGTTCGTCCTTGACGCCACGGACGGTGTCGGGCTGTCGCCGGAGCAGATGCGGATGCTCGTCACGGGCCTCGGGCTGGTCGCCGCGGAGATCGTGAACGCGGTGCCGGAGCTGCCGGTCACCGTCGCGATCCAGGACGTCGAGGAGAACATGATGGACTATCAGGACGAGGGCATGGCCGCGGCGGTCCTCGGCTGGGCGATCAACGAGTTCGGGCTGCCGCCGCGGGAGATTCCGGTGACGTACCTCAGCGTCGAGCGGCGGTACGTCTTCGACTTCGACGCGGTGCGACCGGCCGGCTGATCCGGTCAGGTGCACGATGGAGAGAAGCGGCCGGAGGGCCGGCTCACCGGAAGGTGTAGTCGG

片段2
CCGAACACGCCATCACCCCGACGCTGCCGATGCCCGGCGCCGTGGAGGCCCTCGCGGCGGTGCGCGCCCTCGGACTGCGGGTGGTGGTGGTCACCTCGAAGATCGGCCGGCTCGCCGAGATGCACCTGGCCCACCTCGGGATGGCCGCCGATGAGCTGGCCGGTGACCTGTTCGCCGAGGGCAAGGCCGCCGCGGTGACCGAGCACGGGGTGCGGTGGTACGTCGGCGACCACGTCGGGGACATGATCGCCGCCCGGACCGCCGGCGTGCCCGGGATCGGCGTCACCACCGGTCCGTGCGCTGCTGACGAGCTGTGGGCGGCTGGTGCGTCGTCCGTGATTCCGGACCTTCTCGCCCTGCCCGGTTTGTTGCGGGAGATAACGGTTGGGCCCGGACCGGAAGGGTCGATAGCCTTGAGGCCACGTTCCAGCGAATGAGTTGAGGTCAGCGGTGCCCACGGGTCGAGTGAAGTGGTACGACGCGACGAAGGGATTCGGATTCG TCACCAGTGACGAGGGCGGGGATGTCTTCCTGCCCAAGGGCGCGCTGCCGGCCGGCGTGGCCGAGCTCAAGAC


重叠PCR和融合PCR是一样的概念吗?谢谢。

将这两段DNA连接起来

要求在片段1引物中加入酶切位点(NheI,GCTAGC)和(PmeI,GTTTAAAC),在片段2引物中加入酶切位点(PmeI,GTTTAAAC)和(SphI,GCATGC)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzhfood

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-28 09:29:37
不用加PmeI的酶切位点,只要在片段1的下游引物上在延伸出20BP到片段2,在片段2的上游引物上在延伸出20BP到片段1。在把两个片段千倍稀释,放在一个PCR管里,加片段1的上游,和片段2的下游,就能批出整条链了。你加酶 ...

谢谢,如何设计引物?OVERLAP PCR原理我明白了,这两段DNA的引物怎么设计出来?
3楼2015-01-28 09:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用加PmeI的酶切位点,只要在片段1的下游引物上在延伸出20BP到片段2,在片段2的上游引物上在延伸出20BP到片段1。在把两个片段千倍稀释,放在一个PCR管里,加片段1的上游,和片段2的下游,就能批出整条链了。你加酶切位点的话还的算哪多出来的几个碱基,3片段连接也不是和好连。
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-01-28 09:29:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xzhfood at 2015-01-28 09:34:31
谢谢,如何设计引物?OVERLAP PCR原理我明白了,这两段DNA的引物怎么设计出来?...

就多加20BP呀,其他的就和一般的引物一样了,也就是说你会有2对40多BP的引物。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-01-28 09:46:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzhfood

荣誉版主 (著名写手)

F1-FOR (NheI): GCGCGCTAGCGCGGTGGTTGTGGTGAGAAGC
F2-REW (PmeI):GTCGGGGTGATGGCGTGTTCGGTTTAAACCCGACTACACCTTCCGGTGAG
and
F3-FOR (PmeI):CTCACCGGAAGGTGTAGTCGGGTTTAAACCGAACACGCCATCACCCCGAC
F4-REW (SphI):GCGCGCATGCCGAATCCGAATCCCTTCGTCG
5楼2015-01-28 11:15:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +13 且听虎啸 2026-08-07 16/800 2026-08-09 13:28 by 天神眷顾
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见