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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 洋葱表皮亚细胞定位，这些星星点点的东西是什么？？
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alman001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 带锁的季节 at 2015-01-17 14:34:07
楼主，我想问一下，做植物亚细胞定位需要您提到的Marker吗，我在做转基因拟南芥的亚细胞定位，我看的文献上（含GFP）只有空载、转基因（有白光 荧光 叠加），这样就说明在目的基因在细胞核中表达啦。难道是因为您的 ...

根据我的经验，现在做亚细胞定位基本都会带marker，尤其是发文章。相互验证更准确一些，定位在细胞膜的要做质壁分离、细胞核的做DAPI、细胞器的同时转相应的marker。你的转化拟南芥的载体是直接有GFP的是吗，那直接提个原生质体，如果有marker载体的的话就再把这个载体导进去看，原生质体没法质壁分离，你的基因要是在膜上就要找相应的膜marker了。我懂得不多，但差不多就是这个情况。
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有事做，无事争
11楼2015-01-17 19:18:07
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带锁的季节

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by alman001 at 2015-01-17 19:18:07
根据我的经验，现在做亚细胞定位基本都会带marker，尤其是发文章。相互验证更准确一些，定位在细胞膜的要做质壁分离、细胞核的做DAPI、细胞器的同时转相应的marker。你的转化拟南芥的载体是直接有GFP的是吗，那直接 ...

我转化的载体直接带EGFP，我的目的基因理论表达应该在细胞核，DAPI是直接染色细胞核，那我直接制备原生质体染色前后观察就可以了吗
非常感谢
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12楼2015-01-18 19:31:02
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带锁的季节

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by alman001 at 2015-01-17 19:18:07
根据我的经验，现在做亚细胞定位基本都会带marker，尤其是发文章。相互验证更准确一些，定位在细胞膜的要做质壁分离、细胞核的做DAPI、细胞器的同时转相应的marker。你的转化拟南芥的载体是直接有GFP的是吗，那直接 ...

DAPI只能穿过细胞膜，所以我要用DAPI染色的话只能制备原生质体之后再染色 对吗？？？
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13楼2015-01-18 19:44:51
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alman001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 带锁的季节 at 2015-01-18 19:31:02
我转化的载体直接带EGFP，我的目的基因理论表达应该在细胞核，DAPI是直接染色细胞核，那我直接制备原生质体染色前后观察就可以了吗
非常感谢...

dapi我还真没有用过，原声质体是不是比较脆弱，dapi好像有毒是吗，加进去会不会损坏原生质体啊，我这个没做过，没法给你建议，不好意思
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有事做，无事争
14楼2015-01-18 22:34:31
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带锁的季节

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by alman001 at 2015-01-18 22:34:31
dapi我还真没有用过，原声质体是不是比较脆弱，dapi好像有毒是吗，加进去会不会损坏原生质体啊，我这个没做过，没法给你建议，不好意思...

好的 也非常感谢您
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15楼2015-01-19 08:24:26
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
你用农杆菌做的还是基因枪？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
16楼2015-01-22 00:35:04
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alman001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by lijianfu12 at 2015-01-22 00:35:04
你用农杆菌做的还是基因枪？

基因枪，有高见？
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有事做，无事争
17楼2015-01-22 22:36:54
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laolaohutu

银虫 (正式写手)
这应该算定位在细胞质吧，一般GFP的表达就会弥散在细胞质里。能请教下楼主，做洋葱亚细胞定位的经验吗？不知道楼主观察绿色荧光是在什么显微镜下观察？还是用激光共聚胶什么的？我用倒置显微镜观察，发现未做任何处理的洋葱表皮细胞也有绿色荧光，能请教下楼主关于洋葱亚细胞定位的经验吗？本人不甚感激
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请享受无法回避的痛苦
18楼2015-03-28 10:24:31
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alman001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by laolaohutu at 2015-03-28 10:24:31
这应该算定位在细胞质吧，一般GFP的表达就会弥散在细胞质里。能请教下楼主，做洋葱亚细胞定位的经验吗？不知道楼主观察绿色荧光是在什么显微镜下观察？还是用激光共聚胶什么的？我用倒置显微镜观察，发现未做任何处 ...

我做的水平也很一般，我用的是nikon共聚焦显微镜，是的，洋葱表皮经常会有背景绿色荧光，但如果真正是在某个细胞有了定位结果我想是没有背景绿色荧光的，那些没定位上的通常会出现背景荧光，我没什么好的经验，就是反复做，不好意思啊
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有事做，无事争
19楼2015-05-27 08:54:13
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alman001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by starseacow at 2015-01-16 00:28:54
很多类似结果，帮你在网上随便找了一个，但具体是什么最好用marker判断
Rice Phospholipase A Superfamily: Organization, Phylogenetic and Expression Analysis during Abiotic Stresses and Development
Sing ...

谢谢您 ，您给我的文献我已经看到了，您还有没有现成的这样定位的文献呢，我想多参考几篇，毕竟自己去找犹如大海捞针啊，谢谢啦！
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有事做，无事争
20楼2015-05-27 09:00:53
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