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alman001

铜虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by 带锁的季节 at 2015-01-17 14:34:07
楼主,我想问一下,做植物亚细胞定位需要您提到的Marker吗,我在做转基因拟南芥的亚细胞定位,我看的文献上(含GFP)只有空载、转基因(有白光 荧光 叠加),这样就说明在目的基因在细胞核中表达啦。难道是因为您的 ...

根据我的经验,现在做亚细胞定位基本都会带marker,尤其是发文章。相互验证更准确一些,定位在细胞膜的要做质壁分离、细胞核的做DAPI、细胞器的同时转相应的marker。你的转化拟南芥的载体是直接有GFP的是吗,那直接提个原生质体,如果有marker载体的的话就再把这个载体导进去看,原生质体没法质壁分离,你的基因要是在膜上就要找相应的膜marker了。我懂得不多,但差不多就是这个情况。
有事做,无事争
11楼2015-01-17 19:18:07
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带锁的季节

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by alman001 at 2015-01-17 19:18:07
根据我的经验,现在做亚细胞定位基本都会带marker,尤其是发文章。相互验证更准确一些,定位在细胞膜的要做质壁分离、细胞核的做DAPI、细胞器的同时转相应的marker。你的转化拟南芥的载体是直接有GFP的是吗,那直接 ...

我转化的载体直接带EGFP,我的目的基因理论表达应该在细胞核,DAPI是直接染色细胞核,那我直接制备原生质体染色前后观察就可以了吗
非常感谢
12楼2015-01-18 19:31:02
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带锁的季节

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by alman001 at 2015-01-17 19:18:07
根据我的经验,现在做亚细胞定位基本都会带marker,尤其是发文章。相互验证更准确一些,定位在细胞膜的要做质壁分离、细胞核的做DAPI、细胞器的同时转相应的marker。你的转化拟南芥的载体是直接有GFP的是吗,那直接 ...

DAPI只能穿过细胞膜,所以我要用DAPI染色的话只能制备原生质体之后再染色 对吗???
13楼2015-01-18 19:44:51
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alman001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 带锁的季节 at 2015-01-18 19:31:02
我转化的载体直接带EGFP,我的目的基因理论表达应该在细胞核,DAPI是直接染色细胞核,那我直接制备原生质体染色前后观察就可以了吗
非常感谢...

dapi我还真没有用过,原声质体是不是比较脆弱,dapi好像有毒是吗,加进去会不会损坏原生质体啊,我这个没做过,没法给你建议,不好意思
有事做,无事争
14楼2015-01-18 22:34:31
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带锁的季节

银虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by alman001 at 2015-01-18 22:34:31
dapi我还真没有用过,原声质体是不是比较脆弱,dapi好像有毒是吗,加进去会不会损坏原生质体啊,我这个没做过,没法给你建议,不好意思...

好的 也非常感谢您
15楼2015-01-19 08:24:26
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

你用农杆菌做的还是基因枪?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
16楼2015-01-22 00:35:04
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alman001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by lijianfu12 at 2015-01-22 00:35:04
你用农杆菌做的还是基因枪?

基因枪,有高见?
有事做,无事争
17楼2015-01-22 22:36:54
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laolaohutu

银虫 (正式写手)

这应该算定位在细胞质吧,一般GFP的表达就会弥散在细胞质里。能请教下楼主,做洋葱亚细胞定位的经验吗?不知道楼主观察绿色荧光是在什么显微镜下观察?还是用激光共聚胶什么的?我用倒置显微镜观察,发现未做任何处理的洋葱表皮细胞也有绿色荧光,能请教下楼主关于洋葱亚细胞定位的经验吗?本人不甚感激
请享受无法回避的痛苦
18楼2015-03-28 10:24:31
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alman001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by laolaohutu at 2015-03-28 10:24:31
这应该算定位在细胞质吧,一般GFP的表达就会弥散在细胞质里。能请教下楼主,做洋葱亚细胞定位的经验吗?不知道楼主观察绿色荧光是在什么显微镜下观察?还是用激光共聚胶什么的?我用倒置显微镜观察,发现未做任何处 ...

我做的水平也很一般,我用的是nikon共聚焦显微镜,是的,洋葱表皮经常会有背景绿色荧光,但如果真正是在某个细胞有了定位结果我想是没有背景绿色荧光的,那些没定位上的通常会出现背景荧光,我没什么好的经验,就是反复做,不好意思啊
有事做,无事争
19楼2015-05-27 08:54:13
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alman001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by starseacow at 2015-01-16 00:28:54
很多类似结果,帮你在网上随便找了一个,但具体是什么最好用marker判断
Rice Phospholipase A Superfamily: Organization, Phylogenetic and Expression Analysis during Abiotic Stresses and Development
Sing ...

谢谢您 ,您给我的文献我已经看到了,您还有没有现成的这样定位的文献呢,我想多参考几篇,毕竟自己去找犹如大海捞针啊,谢谢啦!
有事做,无事争
20楼2015-05-27 09:00:53
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