24小时热门版块排行榜    

查看: 1531  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

[求助] cDNA,3.5Kb 扩增不出来 已有2人参与

用玉米叶片提取RNA并反转录为CDNA,我需要扩增的片段为3.52Kb,包括5‘UTR区。做PCR一直跑不出来,一条带也没有。引物的退火温度都是66度以上的,跑程序时退火温度设置为55-62度,这区间的都试了还是没有结果,求各位同仁们指导,谢谢!可否按照KOD酶的两步法跑PCR。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-12 21:52:40
今天遇到两个做玉米的同行了。你这个问题我也曾遇到过。慢慢摸索。建议先换酶,3.5kb可以先试试LA taq。玉米本身基因组结构比较复杂,有很多的转座子,延伸延伸时间,再试试。另外,看看你扩增的片段的GC含量,这个 ...

GC含量30%-40%,不高吧,敢问大师是做玉米哪一方向的

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-01-12 23:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-12 23:00:19
今天遇到两个做玉米的同行了。你这个问题我也曾遇到过。慢慢摸索。建议先换酶,3.5kb可以先试试LA taq。玉米本身基因组结构比较复杂,有很多的转座子,延伸延伸时间,再试试。另外,看看你扩增的片段的GC含量,这个问题曾经困扰过我,后来换用GC buffer解决了这个问题。祝你好运。
2楼2015-01-12 21:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-12 21:52:40
今天遇到两个做玉米的同行了。你这个问题我也曾遇到过。慢慢摸索。建议先换酶,3.5kb可以先试试LA taq。玉米本身基因组结构比较复杂,有很多的转座子,延伸延伸时间,再试试。另外,看看你扩增的片段的GC含量,这个 ...

GC含量30%-40%,不高吧,敢问大师是做玉米哪一方向的

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-12 23:47:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没想好名字

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

其实多次实验发现,你首先用Tm-3试一下,如果什么都没有,可以用两步法Tm-2x5+Tm-10x30来试试,如果都没有,直接换引物,如果有东西,可进一步优化条件。
5楼2015-05-08 15:55:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +7 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 7/350 2026-08-13 15:15 by sELn1rusD174
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +9 瞬息宇宙 2026-08-12 9/450 2026-08-13 10:12 by Vivilian
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见